人脂肪干细胞的获取及其定向分化为内皮细胞差异蛋白筛选的实验研究
【摘要】：
为解决血管组织工程种子细胞来源不足问题,及探索干细胞定向内皮分化的分子机制,本实验以人脂肪干细胞(hADSCs)为研究对象,进行了hADSCs体外分离、培养、扩增和生物学特性的鉴定,最佳内皮细胞诱导分化体系的探索及应用蛋白质组学技术从蛋白质角度筛选hADSCs内皮分化过程中所表达的差异蛋白。
应用胶原酶消化和贴壁筛选联合培养的方法,从人脂肪组织中快速分离获得了hADSCs,经一般生物学特性的检测,证实了我们获得的hADSCs具有较高的纯度,能够稳定的进行传代培养以及冻存、复苏,这符合组织工程对种子细胞的要求。从细胞因子与细胞外基质的角度探讨其对hADSCs定向内皮分化的影响,最终摸索出以纤维粘连蛋白(FN)作为细胞外基质与富含多种生长因子的内皮细胞支持液EGM2-MV﹢高浓度VEGF165(50ng/ml)组成的诱导条件,构成了hADSCs最佳内皮细胞诱导分化的体系。应用蛋白质组学技术首次从蛋白质角度筛选出了hADSCs定向分化为内皮细胞的差异蛋白。为进一步了解其分化过程中的调控机制提供了重要的实验基础。
综上所述,本研究建立了hADSCs体外分离培养及大规模扩增的简易技术;建立了hADSCs体外最佳的内皮细胞诱导分化体系;筛选出hADSCs内皮分化过程中的差异蛋白,初步分析发现了内皮分化相关的10个重要蛋白。上述研究结果为探索hADSCs定向分化的分子机制提供了理论基础,也为人们更好地将hADSCs应用于临床治疗缺血性疾病或血管依赖性疾病,促进组织工程化器官的血管再生,提供了充分的实验依据。
【关键词】：人脂肪干细胞 分离 鉴定 内皮分化 蛋白组学 差异蛋白 【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R329.29
【目录】：
- 提要4-7
- 英文缩略词表7-9
- 第1篇 前言9-11
- 第2篇 文献综述11-33
- 第1章 干细胞11-15
- 1.1 胚胎干细胞12-13
- 1.2 成体干细胞13-15
- 第2章 脂肪干细胞15-22
- 2.1 脂肪干细胞的分离、培养方法15-17
- 2.2 脂肪干细胞的表面标记17
- 2.3 脂肪干细胞的多向分化能力17-21
- 2.4 脂肪干细胞的应用前景21-22
- 2.5 存在问题22
- 第3章 脂肪干细胞向内皮分化22-26
- 3.1 脂肪干细胞内皮分化的理论依据23-24
- 3.2 脂肪干细胞内皮分化的实践依据24
- 3.3 脂肪干细胞定向内皮分化的诱导方法24-25
- 3.4 脂肪干细胞定向内皮分化的鉴定25-26
- 3.5 脂肪干细胞定向内皮分化的意义26
- 第4章 蛋白质组学26-33
- 4.1 蛋白质组学的研究技术27-30
- 4.2 蛋白质组学常用数据库30-31
- 4.3 干细胞与蛋白质组学31-33
- 第3篇 实验研究33-82
- 第1章 hADSCs 分离培养及其细胞生物学特性33-58
- 1.1 hADSCs 分离培养33-36
- 1.2 hADSCs 的一般生物学特性36-44
- 1.3 hADSCs 的多向分化特性44-55
- 1.4 讨论55-58
- 第2章 hADSCs 内皮诱导分化体系的建立58-69
- 2.1 hADSCs 内皮诱导分化体系的建立58-60
- 2.2 hADSCs 内皮诱导分化后的筛选60-61
- 2.3 hADSCs 内皮诱导分化后的鉴定61-66
- 2.4 讨论66-69
- 第3章 hADSCs 内皮分化差异表达蛋白的筛选69-82
- 3.1 总蛋白的制备69-71
- 3.2 蛋白质双向电泳71
- 3.3 蛋白染色71-72
- 3.4 凝胶图像的采集与数据分析72-76
- 3.5 质谱检测76-78
- 3.6 讨论78-82
- 第4篇 结论82-83
- 课题创新性总结83-84
- 参考文献84-99
- 附录99-109
- 攻读博士期间的研究成果109-110
- 致谢110-112
- 中文摘要112-115
- ABSTRACT115-117
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| 1 |
郭新,赵东海,何旭,李玉林,李一雷;大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养[J];吉林大学学报(医学版);2005年03期 |
| 2 |
何旭;王心蕊;张海英;牛云;李玉林;;人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为脂肪细胞方法的建立[J];吉林大学学报(医学版);2006年03期 |
| 3 |
刘元林;于晓妉;刘晓丹;李秀森;毛宁;;间充质干细胞定向成骨细胞分化的蛋白质组学分析[J];第四军医大学学报;2006年17期 |
| 4 |
杨亚军;朱庆生;;CDMP1诱导大鼠脂肪干细胞体外成软骨细胞的实验研究[J];第四军医大学学报;2008年04期 |
| 5 |
周长梅;;干细胞研究进展[J];淮北煤炭师范学院学报(自然科学版);2006年04期 |
| 6 |
陆秋涯;黄立东;陆佩华;;Annexin A2的结构和功能及其与疾病的关系[J];医学分子生物学杂志;2008年02期 |
| 7 |
李文婷;孙华林;许增禄;丁斐;顾晓松;;大鼠骨髓基质细胞向Schwann细胞分化后蛋白表达变化的研究[J];中国科学(C辑:生命科学);2009年02期 |
| 8 |
张勇;赵建宁;;脂肪干细胞的研究进展[J];医学研究生学报;2009年10期 |
| 9 |
陈崎;彭智;;脂肪干细胞在骨、软骨组织工程中的研究进展[J];中国民族民间医药;2009年14期 |
| 10 |
郭新,李伟,朱桂彬,何旭,张丽红,李玉林,李一雷;基质蛋白与整合素参与人骨髓间充质干细胞体外内皮的分化[J];中国临床康复;2005年14期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
杨旭芳;何旭;何牮;张丽红;杨丽;谭晓华;李玉林;;人脂肪干细胞向内皮细胞的定向分化[A];中华医学会病理学分会2010年学术年会日程及论文汇编[C];2010年 |
|
|
|
|
|
| 1 |
郭丽,尹飞,王晓丽,孟洪琪,凌翎,呼合塔娜,范洪学;骨髓间充质干细胞向神经元的诱导分化[J];吉林大学学报(医学版);2003年01期 |
| 2 |
郭新,赵东海,何旭,李玉林,李一雷;大鼠骨髓间充质干细胞的分离培养[J];吉林大学学报(医学版);2005年03期 |
| 3 |
步星耀,黄志起,张永福;骨髓间充质干细胞移植治疗缺血性脑损伤的研究进展[J];实用诊断与治疗杂志;2004年02期 |
| 4 |
步星耀,张永福;骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤[J];实用诊断与治疗杂志;2004年04期 |
| 5 |
王北岳;赵建宁;;组织工程支架在脊髓损伤中的应用[J];医学研究生学报;2008年05期 |
| 6 |
王金良;赵建宁;;复合支架材料在软骨组织工程中的研究进展[J];医学研究生学报;2009年02期 |
| 7 |
李春明;刘毅;;体外培养的人脂肪间充质干细胞生物学特性的研究[J];中国美容医学;2007年02期 |
| 8 |
王林;研究与开发人体干细胞[J];全球科技经济瞭望;2002年01期 |
| 9 |
林戈;卢光琇;;干细胞概述[J];生命科学;2006年04期 |
| 10 |
李凌松;王莉;;胚胎干细胞[J];生命科学;2006年04期 |
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