收藏本站
《吉林大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

羊传染性脓疱病毒重组DNA疫苗的构建与实验免疫研究

赵魁  
【摘要】: 养羊业是我国畜牧业的一个重要内容,然而,长期以来,养羊业并未象养猪业、养鸡业等一样受到人们的重视,因此仍处于较为落后的状况。此外,羊群密度的增大、频繁的从外地引种以及粗放的饲养管理等因素的存在导致羊痘、羊传染性脓疱病、蓝舌病、坏死杆菌病等一些严重危害养羊业发展的疾病的频繁发生。羊传染性脓疱病作为羊群中常见的病毒性传染病之一,严重威胁着养羊业的健康发展。近年来,该病的发生呈上升趋势,因此不断有该病发生和流行的报道。本研究对长春市郊养羊户饲养羊群中一起疑似羊传染性脓疱病例进行分析,根据流行病学特点、临床症状和系统的病理学观察以及分子生物学检测等实验室诊断结果,证实该病为羊传染性脓疱病。然后利用原代犊牛睾丸细胞从病羊唇部痂皮中成功分离获得1株病毒,并通过形态学观察、理化学测定、动物回归试验和PCR等方法对该病毒进行鉴定,证实其为羊传染性脓疱病毒(ORFV),被命名为ORFV/JL/08/CC。将经超速离心纯化的病毒免疫家兔制备出多抗,通过免疫组织化学检测病原在各组织脏器中的分布情况,结果显示,在感染唇部皮肤棘细胞的胞浆中表现出阳性反应,从而进一步证明了该病的发生原因为感染ORFV所致。而对ORFV/JL/08/CC分离株的分离鉴定为进行针对羊传染性脓疱病的疫苗研制提供物质条件。然后利用PCR扩增获得该病毒株的主要免疫原性基因ORFV 011(B2L)和ORFV 059(F1L),测序后提交Genbank收录(登录号分别为FJ808074和FJ808075)。此外,从氨基酸和核苷酸水平上对其同源性进行分析,同时对两基因进行了遗传进化分析。结果表明,该分离株的ORFV 011(B2L)和ORFV 059(F1L)基因高度保守,可作为核酸疫苗研制的目的基因。在获得ORFV 011(B2L)和ORFV 059(F1L)的基础上,利用一编码(G4S)2多肽的碱基linker连接并通过重叠PCR的方法扩增获得ORFV 011(B2L)-linker-ORFV(F1L)融合基因,在此基础上,利用pcDNA3.1(+)真核表达载体成功构建了相应的疫苗质粒,通过脂质体法将其分别转染MDBK细胞,并通过RT-PCR、间接免疫荧光、SDS-PAGE以及Western-blotting等方法从mRNA水平和蛋白水平上证实了目的基因在动物细胞的转录和表达,这将为我们后续进行的动物免疫试验提供理论依据。采用初免-加强免疫的策略,将制备纯化的疫苗质粒经肌肉注射免疫Balb/c小鼠,之后通过间接ELISA、淋巴细胞增殖试验、流式细胞术等方法对疫苗质粒引起机体特异性的细胞免疫应答和体液免疫应答水平进行检测,结果表明,构建的疫苗质粒能够诱导免疫小鼠产生特异性的细胞免疫应答和体液免疫免疫应答,且以Th1型免疫应答为主;攻毒试验结果表明所构建的疫苗质粒安全性好,且能提供有效的免疫保护,该研究结果将为后续进行羊只免疫试验及其在临床上的应用奠定基础。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S852.65

手机知网App
【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 苏高莉;赵魁;孙秀萍;何叶;周平;潘伟;包英夫;李吉达;宋德光;高丰;;羊口疮病毒农安分离株的分离鉴定及Orf059(F1L)基因的序列分析[J];中国兽医学报;2013年01期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 韩铁锁;SSM-CVB3感染猕猴模型的建立及其致病性的研究[D];吉林大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 王改丽;RNAi抑制羊传染性脓疱病毒增殖效果的研究[D];吉林大学;2012年
2 李姗姗;利用RNAi技术建立抗羊传染性脓疱皮炎病毒的细胞株[D];黑龙江八一农垦大学;2012年
3 王锴桦;羊传染性脓疱病毒F1L基因重组腺病毒的构建与鉴定[D];吉林农业大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 罗云;申之义;;羊传染性脓疱病毒分离及生物学特性研究[J];中国畜牧兽医;2007年01期
2 赵魁;贺文琦;高丰;;羊传染性脓疱皮炎病毒研究进展[J];中国畜牧兽医;2008年11期
3 薛掌林;薛双虎;吕武夫;赵立志;王廷璞;;中和试验对羊传染性脓疱皮炎抗体的检测[J];甘肃畜牧兽医;1990年02期
4 陈燕军;羊口疮的研究——血清学方法的研究[J];兽医科技杂志;1982年07期
5 詹述宣,薛双虎,薛掌林,曾凡珠,李炳丁,李发庭;犊牛睾丸细胞培养羊传染性脓疱皮炎病毒的研究[J];兽医科技杂志;1983年07期
6 王廷璞,薛双虎,吕武夫;羊传染性脓疱炎病毒的免疫特性[J];中国兽医科技;1990年02期
7 王廷璞;赵菲佚;安建平;孙春香;党岩;;羊传染性脓疱病毒42K囊膜蛋白基因克隆及表达[J];中国预防兽医学报;2006年01期
8 张文军;王桂芳;赵立勋;;人类禽流感病毒感染的药物防控研究进展[J];中国抗生素杂志;2006年02期
9 左玉婷,靳诚,王锡祯,沈正达;羊口疮病毒的提纯及其囊膜亚单位的分离鉴定[J];中国兽医杂志;1988年07期
10 赵立志,薛双虎,吕武夫,薛掌林,王廷璞;羊传染性脓疱皮炎病毒的细胞培养[J];中国兽医杂志;1991年08期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 邵洪泽;毛文智;宋阳;李琳;程荣华;;羊传染性脓疱病毒B2L基因片段重组腺病毒载体的构建[J];安徽农业科学;2010年13期
2 潘明兴;;人兽共患病病原对人感染的预防措施[J];动物医学进展;2009年02期
3 向智龙;程振涛;卓建华;欧德渊;文明;周碧君;尹传宝;吴飞;冯会利;刘芳;冉光鑫;鲜思美;;羊口疮病毒PCR检测方法的建立与应用[J];贵州农业科学;2010年07期
4 沈正达;靳诚;沈斌元;王锡祯;罗德英;卢洪英;潘光炎;滕振文;陈燕军;宋勇;白吉荣;左玉婷;胡永浩;王蒲;汪清;常泽生;;羊口疮的研究[J];甘肃农大学报;1989年01期
5 赵魁;贺文琦;高丰;;羊传染性脓疱皮炎病毒研究进展[J];中国畜牧兽医;2008年11期
6 向智龙;卓建华;程振涛;欧德渊;鲜思美;尹传宝;黄璐;禾彩红;;贵州地区羊口疮病毒B2L基因克隆及原核表达载体构建[J];中国畜牧兽医;2011年07期
7 周永连,欧阳荣升,潘叔惠,姚茂根;速效碘杀灭羊传染性脓疱病毒试验[J];贵州畜牧兽医;1997年06期
8 刘廷江;程振涛;向智龙;江楠;龙雨清;李廷强;;贵州省羊口疮病例分子生物学诊断[J];贵州畜牧兽医;2011年05期
9 向智龙;水超;程振涛;鲜思美;欧德渊;禾彩虹;黄露;;羊口疮的PCR检测及病理组织学观察[J];贵州畜牧兽医;2012年01期
10 姚俊;李富祥;彭海生;鲁富有;张乔明;李华春;;羊口疮病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J];动物医学进展;2012年11期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 邵洪泽;毛文智;李琳;刘云志;程荣华;姚新华;;羊传染性脓疱诊断方法的研究进展[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 郭巍;山羊痘病毒基因缺失转移载体及基因缺失突变毒株的构建[D];东北农业大学;2005年
2 周必英;细粒棘球绦虫重组Bb-Eg95-EgA31疫苗构建及其免疫机制研究[D];重庆医科大学;2010年
3 郭良兴;吉林省羊传染性脓疱病流行病学调査及其灭活疫苗的研制[D];吉林大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张冰冰;羊传染性脓疱病毒感染羔羊细胞免疫应答变化规律的研究[D];吉林大学;2011年
2 张学禹;羊传染性脓疱病毒VEGF基因的克隆及PCR诊断方法的研究[D];吉林农业大学;2011年
3 张海瑞;羊口疮病毒的分离鉴定及其ELISA检测方法的建立[D];中国农业科学院;2011年
4 林思宇;县级医疗卫生机构流感大流行防控策略研究[D];华中科技大学;2009年
5 李梓;达菲对甲型流感病毒在A549细胞上复制的影响[D];湖南农业大学;2011年
6 李会荣;CPDV的分离鉴定、PCR检测方法的建立及B2L基因同源性分析[D];西北农林科技大学;2004年
7 郭巍;羊痘病毒P32基因的克隆与表达[D];东北农业大学;2004年
8 罗云;羊传染性脓疱病毒生物学特性及PCR检测方法的研究[D];内蒙古农业大学;2006年
9 王辉;羊传染性脓疱病毒F1L基因克隆、序列分析及核酸探针的研究[D];内蒙古农业大学;2007年
10 赵晓军;羊传染性脓疱病毒分离株B2L基因的克隆与序列分析及PCR诊断方法的研究[D];内蒙古农业大学;2007年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 贺文琦;陆慧君;宋德光;成军;盖显英;陈启军;高丰;;川金丝猴柯萨奇病毒的分离鉴定[J];病毒学报;2008年04期
2 齐峰,黄炎,胡凤英;柯萨奇病毒性脑膜脑炎及肝损害一例报告[J];白求恩医科大学学报;1989年02期
3 盖显英;孙景辉;贺文琦;陆慧君;杜牧;宋德光;陈启军;高丰;;柯萨奇B3病毒川金丝猴分离毒株实验性感染BALB/c小鼠的病理形态学[J];吉林大学学报(医学版);2009年01期
4 方超平,方凤,沈茜,马大烈,魏红霞,徐玉莲;新生鼠呼吸道感染CVB_3致气道炎症的病理学观察[J];第二军医大学学报;2001年05期
5 方超平,方凤,沈茜,李闻捷,魏红霞,徐玉莲,陈若华,夏金辉;柯萨奇B_3病毒吸入致新生鼠持续气道高反应性的观察[J];第二军医大学学报;2002年02期
6 沈茜,方凤,姜爱琴,徐玉莲;柯萨基B组病毒性心肌炎患儿血清TNF-α、IL-8、IL-6和sIL-2R变化[J];第二军医大学学报;1997年05期
7 齐桓;;以AdMax载体系统构建和制备肾癌相关抗原G250基因重组腺病毒表达载体[J];南方医科大学学报;2008年09期
8 黎皓;人腺病毒载体的研究进展[J];国外医学.病毒学分册;1998年02期
9 赵魁;贺文琦;高丰;;羊传染性脓疱皮炎病毒研究进展[J];中国畜牧兽医;2008年11期
10 薛掌林;薛双虎;吕武夫;赵立志;王廷璞;;中和试验对羊传染性脓疱皮炎抗体的检测[J];甘肃畜牧兽医;1990年02期
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 李哲;诱导胰腺和心肌病变的柯萨奇病毒B3 MKP株全基因组核苷酸序列分析[D];吉林大学;2007年
2 郭林;大负荷训练导致大鼠肾组织微细结构变化和分子调控机理的探讨[D];北京体育大学;2005年
3 崔丽瑾;应用RNA干扰技术抑制口蹄疫病毒复制与感染的研究[D];吉林大学;2008年
4 陆慧君;猪血凝性脑脊髓炎病毒的分离鉴定及其受体的筛选[D];吉林大学;2008年
5 盖显英;利用BALB/C小鼠及其原代培养心肌细胞研究川金丝猴源CVB3的致病性[D];吉林大学;2009年
6 王亚峰;余甘根苷B抗柯萨奇病毒B3作用及机制的初步研究[D];暨南大学;2009年
7 贺文琦;川金丝猴源柯萨奇B3病毒的分子特征及其致病性初步研究[D];吉林大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 张海瑞;羊口疮病毒的分离鉴定及其ELISA检测方法的建立[D];中国农业科学院;2011年
2 尉超;川金丝猴源CVB3荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用[D];吉林大学;2009年
3 张健;CVB病毒感染及免疫失衡与2型糖尿病相关性研究[D];天津医科大学;2009年
4 彭莹;CAR和DAF在CVB3感染HeLa细胞中的上调变化规律[D];山东大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 陈忠斌,王升启;抗流感病毒药物的研究进展[J];国外医学.药学分册;1998年02期
2 詹述宣;薛双虎;薛掌林;李炳丁;曾凡珠;李法庭;;羔羊传染性口膜炎病毒单层组织细胞培养的研究[J];甘肃畜牧兽医;1982年01期
3 王廷璞,赵菲佚,孙春香,党岩;光敏生物素和DIG标记Orf病毒DNA探针的研究[J];生物技术;2002年06期
4 王廷璞,薛双虎,吕武夫;羊传染性脓疱炎病毒的免疫特性[J];中国兽医科技;1990年02期
5 王廷璞,赵菲佚,党岩,孙春香;光敏生物素标记IgG检测羊接触传染性脓疱性皮炎病毒囊膜蛋白及重组表达蛋白[J];中国兽医科技;2003年05期
6 王廷璞;赵菲佚;安建平;孙春香;党岩;;羊传染性脓疱病毒42K囊膜蛋白基因克隆及表达[J];中国预防兽医学报;2006年01期
7 王廷璞,薛双虎,吕武夫,孙春香;一种新的DNA回收方法[J];中国兽医学报;1996年03期
8 王廷璞,薛双虎,吕武夫,孙春香,杨录明,党岩;羊接触传染性脓疱性皮炎病毒核酸及蛋白类型分析[J];中国兽医学报;1998年04期
9 张家确;吴景央;;一起人畜共患羊传染性脓疱病的调查[J];中国兽医杂志;2006年09期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘秉正;物理科学与生命科学的关系[J];吉林师范大学学报(自然科学版);1992年02期
2 陈叙龙,张清敏,张毓琪,张宝东,陈素平;鲤鱼肝胰脏线粒体DNA的分离、纯化方法[J];环境化学;1994年03期
3 周晓慧;DNA与免疫[J];承德医学院学报;1998年02期
4 张爱民,张建民;论基因组的分子进化[J];菏泽师范专科学校学报;1998年02期
5 房经贵,章镇,刘大钧,马正强,JossiHillel;一种从贮藏较久番茄叶中提取适于PCR扩增的DNA的方法[J];植物生理学通讯;2000年01期
6 朱长军,张利宁,马春红,曹英林,宋静;一种新型杆状病毒亲本株的鉴定及病毒DNA的纯化[J];山东医科大学学报;2000年01期
7 张秀花,弓巧娟;分子内电荷转移荧光探针DMAHF的介质效应及与DNA的作用[J];山西大学学报(自然科学版);2000年01期
8 宗仁鹤,白春礼,李振刚,汪新文,聂焰,龚为穗,杨安庆,龚立三;激光对DNA作用机理的AFM研究[J];激光生物学报;2001年01期
9 宗志新,龚国权;阿的平荧光猝灭法测定 DNA(英文)[J];兰州大学学报(自然科学版);2002年02期
10 张李阳;固体发酵红曲霉菌生物量测定方法的研究[J];南京晓庄学院学报;2002年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘海英;陈刚;步宇翔;;碱基对的多铜修饰对DNA导电性的增强作用[A];中国化学会第28届学术年会第13分会场摘要集[C];2012年
2 赵宏远;李俊杰;桑润滋;;单细胞凝胶电泳技术检测不同处理山羊精子DNA损伤[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(下册)[C];2010年
3 刘玲;付强;朱化彬;彭秀丽;郝海生;杜卫华;赵学明;王栋;;牛毛囊基因组DNA制备方法的比较研究[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
4 梁春柳;;一个新的筛选化合物与DNA交互作用的简便方法[A];2010年全国药物毒理学学术会议论文集[C];2010年
5 张文众;李永宁;方瑾;梁春来;张倩男;;体外新评价方法——完整细胞核DNA检测板[A];全国生化/工业与卫生毒理学学术会议论文集[C];2010年
6 邹丹丹;汪海林;;基于DNA甲基化结合蛋白MBD的甲基化分析[A];中国化学会第28届学术年会第2分会场摘要集[C];2012年
7 张晔;杜智;杨斌;高英堂;;检测外周血中游离DNA的应用前景(综述)[A];天津市生物医学工程学会第29届学术年会暨首届生物医学工程前沿科学研讨会论文集[C];2009年
8 赵淑珍;刘光珍;;DNA免疫吸附治疗狼疮性肾炎的临床观察[A];第十一届全国中西医结合肾脏病学术会议论文汇编[C];2010年
9 陈士林;;中药DNA条形码鉴定体系[A];第十届全国药用植物及植物药学术研讨会论文摘要集[C];2011年
10 陆佳飞;周克隆;王缦;;磁珠法快速提取乙型肝炎病毒DNA的研究及其在诊断试剂中的应用[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 陈杰;信息技术将重组汽车DNA[N];科技日报;2010年
2 刘霞;科学家研发出新型人工合成DNA载体[N];科技日报;2010年
3 南方;化危为机 企业需韧性生长的DNA[N];中国企业报;2009年
4 吴强;港大引新技术DNA辨食材[N];中国食品质量报;2010年
5 本报记者 施晓焰 通讯员 马丽娟;云南:DNA数据库成“打拐”得力帮手[N];人民公安报;2009年
6 张巍巍;垃圾DNA可促进癌症发展首获证实[N];科技日报;2010年
7 常丽君;虱子DNA表明人类17万年前首次穿衣[N];科技日报;2011年
8 记者 冯卫东;DNA碱基序列决定其光敏性假设获证实[N];科技日报;2008年
9 许文强;拆、装更便捷的DNA双螺栓结构模型[N];大众科技报;2008年
10 记者 常丽君;研究人员发现自组装DNA链的最佳长度[N];科技日报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵魁;羊传染性脓疱病毒重组DNA疫苗的构建与实验免疫研究[D];吉林大学;2010年
2 万超;抗猪瘟嵌合DNA疫苗及TRIF的DNA疫苗佐剂效应研究[D];武汉大学;2009年
3 刘泽;口服沙门菌递送治疗性HBV-HSP70融合DNA疫苗的实验研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2011年
4 郭晓兰;端粒功能异常诱导的DNA损伤反应及其在肿瘤发生中的作用与分子机制[D];重庆医科大学;2010年
5 陈志健;1.8 GHz微波对X射线和阿霉素致淋巴细胞DNA损伤修复及对蛋白表达的影响[D];浙江大学;2010年
6 朱慧芳;Y家族DNA聚合酶对化学致癌物MNNG应答的转录调控研究[D];浙江大学;2009年
7 赵丽霞;克隆绵羊印记相关基因的DNA甲基化研究[D];内蒙古农业大学;2010年
8 沈美龙;基于DNA免疫的乙型肝炎病毒表面抗原大中小蛋白的免疫原性研究[D];南京医科大学;2010年
9 徐铁刚;细菌DNA磷硫酰化修饰与限制[D];上海交通大学;2008年
10 高鹏;特异性介导DNA转导的多结构域嵌合蛋白的构建、表达及鉴定[D];吉林大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 芦丽淦;柚皮素及聚乙二醇增强乙肝DNA疫苗免疫效果的研究[D];河南大学;2010年
2 丁珍珍;结核分枝杆菌Ag85A基因DNA疫苗的构建及其联合人IL-12表达质粒诱导的小鼠细胞免疫应答观察[D];重庆医科大学;2011年
3 李芳;基于磁性微粒的法医样本DNA纯化[D];西北大学;2011年
4 杨锦艳;六种香豆素有效成分与DNA相互作用的研究[D];山西医科大学;2010年
5 林启凰;用于乳腺蛋白标志基因检测的DNA电化学生物传感器的研究[D];福建医科大学;2010年
6 于文静;亚麻韧皮部特异启动子克隆与26份种质DNA指纹图谱构建[D];中国农业科学院;2010年
7 Rebecca Simisola Agboola;硼(B)和氯化钠胁迫处理诱导高粱(Sorghum bicolor)自交系发生形态和DNA甲基化的变异[D];东北师范大学;2010年
8 石微;溴氰菊酯致大鼠DNA损伤及损伤后修复功能的影响[D];青岛大学;2010年
9 张诺;DNA-纳米羟基磷灰石修饰电极的制备及在生物分析中的应用[D];济南大学;2010年
10 郭珈辰;基于图形表示的DNA相似性分析及进化树构建算法研究[D];湖南大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026