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《吉林大学》 2010年
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CPV LAMP检测方法建立和蜘蛛香治疗效果研究

马丽娟  
【摘要】: 犬细小病毒(Canine parvovirus, CPV)是引起犬急性出血性胃肠炎和幼犬急性心肌炎的主要病原。自1977年CPV被分离以来,出现许多新的突变株,在世界范围内广泛传播流行,成为危害养犬业最为严重的急性传染病之一。因此,寻找快速准确的病毒检测方法和探索有效的治疗措施是防治本病例的关键。本研究通过CPV LAMP检测方法的建立和蜘蛛香治疗犬病毒性肠炎效果的研究,一方面为CPV的临床诊断探索新的、快速、便捷的方法和手段,另一方面为中药蜘蛛香治的临床应用提供理论和实验依据,为进一步开发防治犬病毒性肠炎疾病方面特效药物奠定基础。 本文由三部分构成,一是建立了CPV的LAMP检测方法,加快了检测速度,提高了检测的特异性,为CPV的临床诊断提供新的方法。二是开展了中草药蜘蛛香的药理、毒理研究,为其临床用于犬病毒性肠炎的治疗提供实验依据。三是对CPV感染犬的治疗效果进行系统研究,为进一步开发防治犬病毒性肠炎疾病方面特效药物奠定基础。主要试验和结果如下: 1.根据GenBank登录的CPV VP2基因序列,在其序列保守区域设计LAMP引物,利用CPV基因组DNA为模板进行扩增。结果表明:LAMP方法检测灵敏度达到10-1 TCID50/mL;并且与其它细小病毒等无特异性扩增,表现出良好的特异性。与PCR技术相比,LAMP法操作更加简单方便,更适合基层和实验室的快速检测。 2.通过小鼠醋酸扭体法和小鼠热板法研究了蜘蛛香的镇痛作用;通过小鼠碳末推进法研究了蜘蛛香对肠蠕动的影响;通过MTT法检测含药血清对正常小鼠脾淋巴细胞转化的影响,结合中性红吞噬实验检测含药血清对小鼠PMΦ能量代谢水平及吞噬能力的影响,结果表明,蜘蛛香具有外周和中枢镇痛药物活性并能够有效促进肠蠕动,蜘蛛香含药血清能够增强小鼠脾淋巴细胞转化能力,提高PMΦ能量代谢水平和吞噬能力,具有一定的免疫增强作用。 3.通过口服犬细小病毒1ml/kg,建立CPV动物模型,根据临床表现和实验室诊断确诊,观察中药蜘蛛香对CPV的治疗效果。结果表明:发病初期应用蜘蛛香全粉200mg/kg/日治疗,1-3d可治愈。中度症状组配合补液盐,重度症状组配合输液及庆大霉素治疗,1-3d可好转,且治愈率和病情恢复情况明显优于对照组,说明蜘蛛香对犬病毒性肠炎的治疗效果是确切的,并且能明显提高其它药物的治疗效果。
【学位授予单位】:吉林大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S858.292

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