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苹果梨离体叶片再生体系的建立

李文剑  
【摘要】:苹果梨(Pyrus reschneideri Rehd),属蔷薇科(Rosaceae)梨属(Pyrus L)植物,是延边地区的主栽梨品种。建立苹果梨稳定、高效的再生体系,是进行转基因育种的关键环节之一,本试验以苹果梨为材料,研究了影响其无菌体系和再生体系建立的一系列因素,得到以下结论: 1.不同来源的外植体适宜的消毒时间不同。水培萌发茎段适宜的消毒时间为2min,萌芽期茎段的消毒时间为3min,而休眠芽的消毒时间最长为5min。适宜苹果梨水培萌发茎段及萌芽期茎段的初代培养基为1/3MS+1.0mg·L-16-BA+0.2mg·L-1IBA+75mg·L-1Vc,成活率分别为60.12%和59.85%;适宜休眠芽生长的初代培养基为MS+1.5mg·L-16-BA+0.3mg·L-1IBA+7.5mg·L-1GA,萌芽率高达89.62%。但在初代培养阶段,三种材料都无增殖生长,因此应及早转接到继代培养基中; 2.水培萌发及萌芽期的茎段在1/2MS+1.5mg·L-16-BA+0.3mg·L-1NAA生长状况良好,增殖倍数分别为5.12和4.89,而休眠芽增殖培养则需在1/2MS+1.5mg·L-16-BA+0.3mg·L-1NAA和NN69+1.0mg·L-16-BA+0.3mg·L-1NAA两种培养基交替使用的情况下正常生长,增殖倍数在4.0左右; 3.适宜苹果梨分化的外植体为继代4次以上的组培苗叶片,以叶背面接触培养基,将其接种在NN69+1.5mg·L-1TDZ+0.4mg·L-1NAA培养基中,结合20d的暗培养,再生率可以达到71%,平均再生芽数为2.21。叶片培养获得的不定芽接种在1/2MS+1.5mg·L-16-BA+0.3mg·L-1NAA培养基中,生长良好,增殖倍数为4.52; 4.苹果梨组培苗接种在1/4MS+1.5mg·L-1IBA培养基中,经过8d暗培养后生根率能够达到52.6%。


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