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《延边大学》 2014年
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重金属胁迫与生物样品中巯基化合物的应答作用

王宁  
【摘要】:GSH等巯基化合物的测定方法目前文献较多。测定方法是利用衍生化试剂的光度法和分离为基础的分析方法,但目前不同的方法之间还有样品前处理过程的不同,其含量测定结果有较大的差异。本文利用OPA和DTNB衍生化试剂,用活性面包酵母作为活细胞样本,采用细胞破壁、衍生化为一体的前处理方法,分别利用光谱法、色谱法测定了酵母中的GSH和总巯基(-SH)含量,并对不同前处理方法和分析方法的测定结果进行了比对,确立了准确测定生物细胞内的GSH等巯基化合物的分析方法。 谷胱甘肽(GSH)具有重金属解毒作用,而目前大多认为是GSH中的官能团,像巯基、羧基、氨基等对重金属的配位作用所致,但细胞内的GSH对外源性的有毒重金属胁迫的响应及解毒机制尚不十分清楚。本研究用活性酵母为活细胞样本,利用已确立的分析方法测定了不同重金属胁迫时细胞内GSH和总巯基的应答作用,借此进一步探讨了外源性重金属与胞内的GSH和巯基化合物的相互作用机制,为GSH等巯基化合物在重金属解毒中的化学机制的研究提供了基础数据。 第一章绪论 概述了生物细胞内GSH等巯基化合物测定方法及重金属解毒机理研究中目前面临的若干问题,并提出了本文的选题思想和主要研究内容。 第二章同步衍生化光谱法测定活性酵母中还原型谷胱甘肽(GSH)与总琉基(-SH)含量 本研究通过实验证实衍生化试剂DTNB对GSH. Cys以及含半胱氨酸残基的蛋白质中的巯基并无选择性,可以通过定量释放的衍生化产物测定样品中总巯基的含量,衍生化试剂OPA与巯基化合物中的GSH具有选择性作用并生成荧光衍生化产物。本研究采用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化的样品前处理方法,利用OPA和DTNB为衍生化试剂通过荧光分光光度法和UV-Vis分光光度法分别测定了活性面包酵母中GSH和总巯基的含量。酵母中GSH和总巯基的含量分别为12.0213μmol/L-12.0823μmol/g和28.9859-29.2515μmol/L回收率达99.47%和100.65%,其检测限分别为0.2655μmol/L和0.0745μmol/L 第三章DTNB柱前衍生化HPLC法测定酵母中的还原型谷胱甘肽(GSH)和总巯基(-SH) 高效液相色谱法可以测定生物样品中各种巯基化合物(半胱氨酸、谷胱甘肽等)。本研究以DTNB为衍生化试剂,采用细胞破壁、衍生化为一体的同步衍生化的样品前处理方法,利用高效液相色谱法柱前衍生化法测定了酵母中GSH和总巯基含量。酵母中GSH和总巯基的含量分别为12.0569μmol/L和29.2823μmol/Lg,回收率达99.43%和100.87%,其检测限分别为0.2296μmol/L和0.7649μmol/L 第四章重金属胁迫与酵母细胞内巯基化合物的响应机制研究 本研究采用含GSH和巯基蛋白的活性酵母作为生物细胞样本,利用光谱法和色谱法研究不同重金属胁迫时巯基化合物的应答作用。主要探讨了GSH等巯基化合物与Cd、Cu、Cr、Fe、Pb等重金属与巯基化合物的相互作用,为生物细胞对重金属解毒和积累作用的机制的探讨提供基础实验依据。 第五章同步衍生化光谱法测定玉米须中还原型谷胱甘肽(GSH)与总巯基(-SH)含量 本研究利用邻苯二甲醛(OPA)和4,4’-二硫代联吡啶(4-DPS)为衍生化试剂,采用细胞破壁和衍生化为一体的样品前处理方法,分别用荧光分光光度法和UV-Vis分光光度法测定了玉米须中GSH、总巯基(-SH)的含量。玉米须中GSH和总巯基的含量分别为0.0773-0.0788μmol/g和1.0751-1.0874μmol/g,回收率达99.09%和101.30%,其检测限分别为0.0395μmol/L和0.6947μmol/L。
【学位授予单位】:延边大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:O652

【参考文献】
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