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《延边大学》 2002年
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日本脑炎病毒NS1基因的分子克隆与高效表达

金吉东  
【摘要】: 根据日本脑炎病毒NS1序列设计并合成了一对引物P1/P2,采用RT-PCR法从SA-14-14-2株RNA中扩增出1087bp目的片段,将其克隆到pMD18-T克隆载体中,经酶切、PCR鉴定后,再进行序列测定。通过序列分析结果表明,JEV-NS1基因编码区核苷酸序列长度为1056bp,编码352个氨基酸,序列分析和比较表明本实验克隆到的NS1蛋白基因与GenBank中收录的疫苗株SA14-14-2的核苷酸序列一致,表明尽管该疫苗株在我国应用多年,但NS1基因并未发生变异,提示该疫苗株遗传性状比较稳定,是一株优良的疫苗株。 将pMD18-T-NS1经BamHI/HindIII双酶切后定向克隆于经同样酶切处理的pET-30b(+)原核表达载体上,重组质粒经BamHI/HindIII双酶切和NS1蛋白基因特异性引物PCR鉴定,同时进行序列测定,获得重组质粒pET-30b-NS1,转化大肠杆菌BL-21(DE3),经IPTG诱导获得高效表达,产物经SDS-PAGE电泳结果显示,表达产物分子量约为46kDa,Western blot分析表明表达产物具有免疫学活性。 本研究成功地克隆日本脑炎病毒弱毒株SA14-14-2 NS1蛋白基因,测定了其序列,并通过大肠杆菌表达系统高效表达了该基因,为我国JEV-NS1蛋白亚单位疫苗、单克隆抗体的制备和诊断试剂的研究及分子流行病学的调查提供了依据。
【学位授予单位】:延边大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:S852.65

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