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《延边大学》 2003年
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重症肌无力抗乙酰胆碱受体单链抗体基因的构建

金桂花  
【摘要】: 重症肌无力(myasthenia gravis , MG)患者血清中2/3的抗乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor, AChR)抗体是针对α亚单位上主要免疫原区(main immunogenic region, MIR)的抗体,因此针对AChR MIR的抗体成为MG致病机制中的主要的致病性抗体。由抗AChR MIR抗体制备的单链抗体(single chain variable fragment, ScFv)做为单价片段既不与AChR交叉结合,也不引起补体经典途径的激活,因此不会引起AChR的丢失。但是,ScFv与MIR结合后能特异性地封闭致病性AChR抗体与AChR MIR结合,从而对AChR起到保护作用。 本文应用PCR从抗AChR MIR抗体扩增重链可变区(heavy chain variable region , VH)基因,应用纯化试剂盒对PCR产物进行纯化。纯化后的VH PCR产物经NcoⅠ和 XhoⅠ酶切、低熔点琼脂糖凝胶电泳回收及纯化后与经同样酶切割并纯化的载体质粒pHEN2连接。将连接物转化E.coli DH5α扩增,分离纯化重组子再经NcoⅠ和XhoⅠ酶切,并用琼脂糖凝胶电泳检查VH基因的正确性。采用同样的方法将轻链可变区(light chain variable region , VL)基因克隆至pHEN2-VH,并转化E.coli HB2151扩增,用ApalⅠ和NotⅠ酶切检查VL基因的正确性。构建的ScFv经测序发现核苷酸序列正确,并且VH和VL基因正确克隆至载体开放读码框架内。已成功地构建抗AChR MIR ScFv基因,为进一步制备基因工程抗体奠定了基础。
【学位授予单位】:延边大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R392

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