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枇杷叶化学对照品的研究

郭宇  
【摘要】: 我国拥有丰富的药用植物资源,近年来在全世界范围内兴起了用天然药用植物来预防和治疗各种疾病的热潮,但是长期以来人们对于多种药用植物的有效成分、药理和药效的理解和把握还不甚清楚,药用植物鉴定及其质量控制还不完善。因此系统分析药用植物的化学成分,阐明有效部位和活性成分,建立全面反映所含活性成分的植物鉴定和质量控制依据,使传统药用植物被世界所认同和接受,已经成为中医药产业面临的重要课题。 枇杷叶为蔷薇科常绿小乔木植物枇杷[Eriobotrya japonica(Thunb)Lindl]的干燥叶,在我国分布广泛,主产于广东、江苏、浙江、福建、湖北等地。枇杷叶是传统医药学常用中草药,药用历史悠久,具有润肺止咳、降逆止呕之功效,常用于治肺热咳嗽,吐血、胃热逆呕,烦热口渴等疾病。 现代药理学研究表明枇杷叶具有抗炎、止咳作用,临床常用于治疗急慢性呼吸道等疾病。近年研究还发现,枇杷叶有抗肿瘤、抗病毒、降血糖、保肝利胆、清除氧自由基、增强机体免疫功能等作用。药物化学研究表明:枇杷叶中主要含有挥发油、三萜类、倍半萜类、黄酮类、氨基酸、糖类、及其他有机酸类等化学成分。枇杷叶虽为常用中草药,但是2005版药典只收载性状和组织显微鉴别,尚无生物活性成分以及化学标准品的含量测定和定性检查,缺乏科学依据。因此作者对枇杷叶中药材进行了化学成分、HPLC指纹图谱和化学对照品的研究。 本实验分别对枇杷叶采用了乙醇提取和CO_2超临界萃取两种提取方法得到浸膏。对乙醇提取物经过溶剂梯度萃取后的乙酸乙酯萃取物和CO_2超临界萃取物分别进行硅胶柱层析,得到8种已知化合物,并确定了化合物的结构。而后采用HPLC方法,选用10种不同产地的枇杷叶药材对其进行了初步的HPLC指纹图谱方法学研究,建立了枇杷叶的HPLC指纹图谱测定方法,便于比较枇杷叶各产地之间的相关性,同时建立了枇杷叶中熊果酸的HPLC含量测定方法,从而为枇杷叶药材的品质评价、质量标准制定提供依据。 实验结果表明:(一)采用反复的硅胶柱层析对乙酸乙酯萃取物和CO_2超临界萃取物进一步的分离,共得到8个已知化合物。根据理化性质、以及~1H-NMR、~(13)C-NMR和MS等波谱数据分析鉴定了8个化合物的结构,它们分别是:熊果酸(Ⅰ)、齐墩果酸(Ⅱ)、2-羟基-熊果酸(Ⅲ)、蔷薇酸(Ⅳ)、十六碳烯酸(Ⅴ)、十六烷酸(Ⅵ)、β-谷甾醇(Ⅶ)、马斯里酸甲酯(Ⅷ)。(二)按《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》,选用熊果酸作为主要的指标成分进行考查,采用HPLC色谱法对枇杷叶进行指纹图谱的研究,该方法能使枇杷叶中大部分化学成分得到较好的分离,具有良好的稳定性、重现性。从药材整体色谱图着手,选取参照峰、特征峰,判断峰的位置和峰与峰间的比例关系,构成了枇杷叶特有的色谱指纹图谱全貌,而且本方法快速简单易行,为枇杷叶药材的品质评价、质量标准制定提供依据。(三)通过查阅文献得知枇杷叶中的有效成分主要集中在三萜酸类:熊果酸、齐墩果酸、2α-羟基熊果酸、坡模酸、蔷薇酸、马斯里酸甲酯等,在分析了枇杷叶的一系列化合物的基础上,枇杷叶中熊果酸的含量较高,占三萜酸成分的47.8%,因而确定熊果酸作为枇杷叶的对照品,并建立了熊果酸的HPLC测定方法,而后对乙酸乙酯萃取物进行反复硅胶柱层析分离,富集得到熊果酸对照品。


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