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《延边大学》 2010年
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牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因的克隆及PCR诊断方法的建立

沈岩  
【摘要】: 牛瑟氏泰勒虫病是由泰勒科、泰勒属的瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)寄生于牛红细胞和淋巴细胞而引起的一种血液原虫病。近些年,瑟氏泰勒虫病的发生呈上升趋势,给相关国家的畜牧业带来了较大的经济损失,引起了国内外兽医界的广泛关注。因此有必要建立一种快速、敏感、特异诊断方法,以便进行牛瑟氏泰勒虫病的早期诊断和预防。 本试验根据GenBank中报道的牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因序列,设计了两对特异性引物,扩增两条特异性基因片断,再去除重复区,经过拼接得到牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因全序列,进行核苷酸序列分析及同源性比较。再以牛瑟氏泰勒虫18SrRNA基因为靶基因,设计特异性引物建立PCR诊断方法,并进行应用试验。 结果表明,PCR扩增出长为1 173 bp和1 440 bp两条特异性基因片断,去除重.复区拼接得到全长为1 744 bp的牛瑟氏泰勒虫18S rRNA基因序列。同源性比较结果表明,牛瑟氏泰勒虫(Theileria sergenti)与水牛泰勒虫(Theileria buffeli)同源性最高,为99%,与突变泰勒虫同源性最低,为95%。建立的PCR诊断方法不与新孢子虫、弓形虫、羊泰勒虫发生交叉反应,最高敏感度DNA为5.3 fg/μL。对50份样本DNA进行检测,本方法阳性检出率(64.0%)高于金春梅方法阳性检出率(58%)。 本研究为我国瑟氏泰勒虫分子分类学、遗传学以及诊断工作奠定理论基础,为牛瑟氏泰勒虫病的诊断、流行病学调查提供特异、快速、灵敏、简便、高效的诊断方法,以便有效地控制该病的发生与流行。
【学位授予单位】:延边大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:S858.23

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【参考文献】
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