特异性艾滋病核酸疫苗转导载体的构建及初步应用

【摘要】： 当下,在全世界对控制和预防艾滋病病毒(Human immunodeficiency virus,HIV)感染工作中尚无完全有效手段的前提下,要有效的预防并控制艾滋病病毒的感染,最佳的思路是开发出一种能够安全、有效的预防艾滋病病毒感染的疫苗。本研究的目的是构建一种新型的具有特异性的基因转导载体TG蛋白。基于穿膜肽信号肽(TAT)、DNA识别及结合序列系统(GAL4/UAS)上,添加适当的纯化及鉴定标签His-tag,定向克隆得到编码TG蛋白的基因片段。以原核表达系统中的pET-28a为载体构建了并得到了原核表达重组质粒pET-TG。GAL4蛋白具有能够与UAS核苷酸序列特异性结合的能力,所以经过纯化的TG蛋白在一定条件下可在机体外与嵌入荧光蛋白基因EGFP片段的pVAX1-UAS-EGFP质粒特异性结合,然后再利用琼脂糖凝胶电泳实验就可以直观的证明TG蛋白可与pVAX1-UAS-EGFP质粒特异性结合。再摸索出TG蛋白与pVAX1-UAS-EGFP质粒结合活性最高时的质粒蛋白浓度和时间条件。在细胞水平上将蛋白与质粒特异性的结合物产物与293T细胞共浴,最后在荧光显微镜下通过对荧光的检测研究TG蛋白的细胞转导活性。通过大肠杆菌表达系统表达分子量为21kDa的目的蛋白。通过琼脂糖凝胶电泳可以看出质粒与蛋白结合活性最强时质粒量为10μg,蛋白量为16μg,同时TG蛋白在10min内即可与pVAX1-UAS-EGFP结合,2h内其结合效率无明显变化。通过细胞转导发现pVAX1-UAS-EGFP质粒与TG蛋白结合的结合物转导293T细胞均出现特异性荧光,表明TAT基因具有穿膜作用的。本研究为艾滋病核酸疫苗转导载体研究的进一步深入提供依据。

【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2010
【分类号】：R392.1

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