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《长春理工大学》 2016年
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脂质体保护的金纳米基因载体

古晓晓  
【摘要】:基于基因的治疗方法已经应用于临床的研究,以达到治疗或预防各种疾病的目的。基因治疗的成功实现很大程度上依据于递送基因的载体。脂质体、无机纳米粒子、阳离子聚合物等纳米载体在基因治疗中得到较为广泛的应用。本论文研究了阳离子脂质体和金纳米粒子作为基因载体在体外细胞中的转染。主要研究内容如下:1、在阳离子脂质体DODAB中加入一定比例的胆固醇,用琼脂糖凝胶电泳实验证明阳离子脂质体DODAB/Chol与DNA的相互作用。在体外细胞转染实验中,我们探讨了阳离子脂质体DODAB/Chol在HEK 293细胞和HeLa细胞里的转染效率较低。用MTT比色法研究了阳离子脂质体DODAB/Chol在HEK 293细胞中的相对细胞活性。2、用一步合成法合成了阳离子脂质体DODAB/Chol保护的金纳米粒子(AuNPs)。采用紫外可见光吸收光谱,透射电子显微镜和粒度分析仪等方法表征了金纳米粒子。通过琼脂糖凝胶电泳实验考察了金纳米粒子凝结DNA的能力。体外转染实验验证了金纳米粒子在HEK 293细胞里的转染效率有很大的提高。体外细胞的相对活性分析得到,阳离子脂质体DODAB/Chol保护的金纳米粒子对细胞的毒性并没有增加。
【关键词】:阳离子脂质体 DNA 金纳米粒子 基因载体 基因转染
【学位授予单位】:长春理工大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R450;O614.123
【目录】:
  • 摘要3-4
  • ABSTRACT4-7
  • 第一章 绪论7-23
  • 1.1 引言7
  • 1.2 脂质体7-9
  • 1.3 金纳米材料9
  • 1.4 基因载体9-21
  • 1.4.1 脂质体在基因治疗中的应用10-12
  • 1.4.2 阳离子聚合物在基因治疗中的应用12
  • 1.4.3 聚赖氨酸在基因治疗中的应用12-13
  • 1.4.4 聚乙烯亚胺在基因治疗中的应用13-14
  • 1.4.5 壳聚糖纳米粒子在基因治疗中的应用14-16
  • 1.4.6 金纳米粒子在基因治疗中的应用16-18
  • 1.4.7 碳纳米管在基因治疗中的应用18-19
  • 1.4.8 磁性纳米粒子在基因治疗中的应用19-20
  • 1.4.9 二氧化硅纳米粒子在基因治疗中的应用20-21
  • 1.5 选题意义及主要研究内容21-23
  • 第二章 阳离子脂质DODAB/Chol介导的细胞转染23-34
  • 2.1 前言23-24
  • 2.2 主要原料和实验设备24-25
  • 2.3 样品制备25-26
  • 2.3.1 磷脂的制备25-26
  • 2.3.2 质粒的合成26
  • 2.3.3 体外细胞培养26
  • 2.4 分析测试26-28
  • 2.4.1 粒径和Zeta电位分析测定26
  • 2.4.2 琼脂糖凝胶电泳实验26-27
  • 2.4.3 细胞的相对活性实验27
  • 2.4.4 体外细胞基因转染实验27-28
  • 2.4.5 荧光素酶报告实验28
  • 2.5 结果与讨论28-33
  • 2.5.1 材料表征28-29
  • 2.5.2 琼脂糖凝胶电泳实验29-30
  • 2.5.3 体外细胞培养以及转染实验30-32
  • 2.5.4 荧光素酶报告基因实验32
  • 2.5.5 细胞的相对活性分析32-33
  • 2.6 本章小结33-34
  • 第三章 阳离子脂质DODAB和Chol保护的金纳米颗粒介导的基因转染34-47
  • 3.1 引言34-36
  • 3.2 主要原料和实验设备36-37
  • 3.3 样品的制备37-38
  • 3.3.1 磷脂的合成37
  • 3.3.2 纳米金的合成37-38
  • 3.3.3 质粒的合成38
  • 3.3.4 体外细胞培养38
  • 3.4 分析测试38-40
  • 3.4.1 紫外可见光谱测定38
  • 3.4.2 粒径和Zeta电位分析测定38
  • 3.4.3 透射电子显微镜38
  • 3.4.4 琼脂糖凝胶电泳实验38-39
  • 3.4.5 细胞的相对活性实验39
  • 3.4.6 体外细胞基因转染实验39
  • 3.4.7 荧光素酶报告实验39-40
  • 3.5 结果与讨论40-46
  • 3.5.1 材料表征40-42
  • 3.5.2 琼脂糖凝胶电泳实验42-43
  • 3.5.3 体外细胞培养以及转染实验43-45
  • 3.5.4 荧光素酶报告基因实验45
  • 3.5.5 细胞的相对活性分析45-46
  • 3.6 本章小结46-47
  • 结论47-48
  • 致谢48-49
  • 参考文献49-55
  • 附录55

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