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《吉林农业大学》 2011年
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落地生根叶抑菌活性成分的提取及其分析

孙辉  
【摘要】:植物是生物活性化合物的天然宝库,从植物中寻找天然活性物质开发成植物源农药,用于克服化学农药长期带来的污染严重,残留高,安全性差等缺点,具有极其重要的现实意义。 落地生根叶作为一种传统的中药,其对抗病毒抗细菌方面的研究比较广泛,而在抑真菌及抑菌成分方面研究未见报道。本文对落地生根叶乙醇提取物的抑菌活性、抑菌谱以及活性成分最佳提取工艺条件进行了研究;对落地生根叶提取物的稳定性进行了探讨并对其活性成分进行了初步的分离纯化及分析。 采用菌丝生长速率法确定了落地生根叶提取物的抑菌谱。证明落地生根叶提取物对农作物真菌都有一定程度的抑制作用,其中对番茄早疫病菌和水稻立枯病菌的抑制作用最为显著,故选用这两种真菌为本试验的指示菌。选用番茄早疫病菌为指示菌,采用菌丝生长速率和平板菌落计数法两种方法对落地生根叶提取物进行了抑菌活性研究。得出抑菌活性均与提取浓度成正相关,且对其孢子萌发的抑制效果高于对其菌丝生长的抑制效果。 采取4种方法对落地生根叶抑菌活性成分提取做了研究。结果显示超声波乙醇提取的抑菌活性最强,因此选作超声波提取方法进行工艺研究。超声波辅助提取落地生根叶抑菌活性成分的试验中,采用单因素和正交试验得出最佳提取工艺为:提取温度50℃,超声波处理时间60min,乙醇体积分数70%,液料比15:1(m:g),在此条件下提取物对番茄早疫病菌和水稻立枯病菌的抑菌圈直径分别为27.8mm和24.3mm。其次测试了落地生根叶提取物的稳定性,研究表明落地生根叶乙醇提取物的抑菌活性热稳定性和紫外光照射的稳定性较好,pH值在6-7.5范围内抑菌效果稳定且高温条件下的抑菌稳定性也较好。 为了分析落地生根叶的抑菌活性成分,用四种不同极性的溶剂对其水溶液进行萃取,并用菌丝生长速率法对各相的抑菌效果做了评价。结果表明,正丁醇相的抑制效果最强,乙酸乙酯相次之。且对正丁醇相做了成分粗测,结果表明,落地生根叶提取物中含有酚类、有机酸、黄酮类、甾体及香豆素及其苷类等成分,而不含有蒽醌及其苷类。 对正丁醇相萃取物进行梯度洗脱,硅胶G薄板进行TLC检测,跟踪洗脱情况,得到A-F共6个洗脱物,再分别对这些洗脱物进行抑菌活性试验。测定结果得出,流份E对番茄早疫病菌和水稻立枯病菌的抑菌效果最好,抑菌圈直径分别为23.5mm和17.6mm,对E进行二次柱层析,得到对两者抑制作用明显的E2,薄层层析检测E2为黄酮类化合物,HPLC和MS分析得出其分子量为587.1,结构还有待进一步鉴定。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S482.2;S567.239

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【参考文献】
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