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《吉林农业大学》 2011年
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长白山单花橐吾(Ligularia jamesii)组织培养与快繁技术研究

庄倩倩  
【摘要】:本研究以菊科橐吾属植物单花橐吾(Ligularia jamesii)种子为试验材料,首先获得无菌苗,分别取无菌苗的茎尖、叶柄为外植体,建立了单花橐吾的初代培养、继代增殖培养、生根壮苗培养及炼苗移栽培养过程的组织培养技术体系,探讨了基本培养基种类、生长调节剂种类及浓度、蔗糖浓度、活性炭的添加、培养温度等对单花橐吾离体再生培养的影响,并应用spss13.0软件对试验结果进行显著性分析,试验结果如下: (1)无菌苗培养:对单花橐吾种子进行低温层积处理,可显著缩短种子萌发时间,单花橐吾种子在4℃冰箱层积13d,萌发状况最好。种子剥除外果皮后,在无菌条件下用75%酒精浸泡10s,再用0.1%HgC12溶液(加吐温-80)浸泡消毒2min,用无菌水冲洗6-7次,为最佳灭菌万案。最适合单花橐吾种子萌发的培养基为MS+6-BA(0.02mg/L)+蔗糖(30g/L),pH为5.80,最佳催芽温度为15℃,每天光照14h,萌发率可达83%,培养30d小苗株高可达3cm左右,子叶宽圆平展。 (2)茎尖诱导培养:切取无菌苗茎尖部位长约0.2cm作为外植体,最佳诱导培养基为MS+6-BA(3.0mg/L)+NAA(0.3mg/L),添加浓度为35g/L蔗糖,幼芽诱导率可高达90.1%,平均每个茎尖可诱导出芽4.1个,幼芽长势良好。 (3)茎尖诱导幼芽的增殖培养:茎尖诱导出的幼芽仍具有较强的增殖能力,将幼芽彼此分开,转接入增殖培养基中,进行增殖培养。最佳增殖培养基为MS+6-BA(2.5mg/L)+NAA(0.1mg/L),平均增殖系数4.5,植株生长健壮。最佳继代周期为30d,试验发现继代培养到第7次时,不定芽还能较好的保持种质特征,茎尖组织培养快繁总数大于600。 (4)愈伤组织诱导培养:诱导愈伤组织的最佳外植体为叶柄,在MS+6-BA(3.0mg/L)+NAA(0.2mg/L)+蔗糖(35g/L)培养基中,叶柄出愈率达99.5%,愈伤组织鲜绿色、质地紧密,并可分化出少量不定芽,无畸形现象。 (5)愈伤组织不定芽分化培养:将叶柄诱导出的愈伤组织切除生长不良部分,切成1cm2大小,接种于增殖分化培养基中。最佳增殖分化培养基配方为MS+6-BA(1.5mg/L)+NAA(0.1mg/L),可诱导出大量不定芽,不定芽诱导率可高达98.7%,每块愈伤组织可平均产生7.8个不定芽,且不定芽生长健壮。 (6)生根培养的最佳培养基配方为:1/2MS+NAA(0.5mg/L)+IBA(0.2mg/L),提高蔗糖浓度至40g/L可有效达到壮苗目的;在培养基中添加2.0g/L活性炭,可显著缩短生根所需时间,在最佳生根培养条件下,生根率可达99.7%,根系白色,粗壮,有细绒毛,苗生长健壮,叶色鲜绿。 (7)炼苗移栽:最适合单花橐吾小苗移栽的基质为园土:珍珠岩:草炭=1:1:2(体积比)的混合基质,移栽后浇灌浓度为0.1%多菌灵溶液进行基质消毒,小苗地上部扣透明塑料杯进行保湿,放入光照充足、20℃的环境中培养,每天中午通风20min。移栽初期,中午光照强烈时,注意遮阴保护,后期逐渐撤去遮阴物及保湿物。移栽成活率可达100%,小苗长势良好,植株较健壮,叶鲜绿色。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S567.239

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