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《吉林农业大学》 2014年
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猪源益生芽胞杆菌的分离筛选及部分性质研究

魏姗姗  
【摘要】:在畜牧业生产中,猪腹泻可使母猪生产性能降低,同时影响仔猪生长发育,给养猪业造成严重的经济损失。猪细菌性腹泻主要是由大肠杆菌和沙门菌等病原菌引起的,为抑制这些病原菌的生长,预防猪腹泻病,饲养中应用大量抗生素,这导致耐药菌株增多,药物残留。为寻找新型抑制病原菌制剂部分替代抗生素已非常必要。通过大量研究发现,益生芽胞杆菌能够有效抑制肠道致病菌,还能产生多种营养物质,而且安全、无毒副作用。 本研究采集健康仔猪肠道,从空肠黏膜分离到23株对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌有拮抗作用的芽胞杆菌,复筛获得5株拮抗活性较高者;从中筛选出可耐受胆盐、人工胃液和肠液的菌株JN-16,分子生物学和部分生化试验鉴定结果表明:该菌为枯草芽胞杆菌。优化JN-16产生抑菌物质的培养条件,结果表明,以葡萄糖为碳源、大豆蛋白胨为氮源、pH为6.5的培养基,在33℃或37℃下培养24h时,发酵液的抑菌效果最强。用盐酸沉淀和甲醇萃取发酵液中的脂肽类物质,得到脂肽类抑菌物质粗提物,牛津杯法抑菌试验发现:脂肽类抑菌物质抑制大肠杆菌(抑菌圈直径14.3mm)和金黄色葡萄球菌(抑菌圈直径17.5mm)效果较好;应用盐析法提取抑菌蛋白粗提物,结果显示其抑制大肠杆菌(抑菌圈直径12mm)和金黄色葡萄球菌(抑菌圈直径12mm)的效果较脂肽类弱。应用蛋白质透析法初步纯化抑菌蛋白,纯化后的抑菌蛋白抑菌效果增强。用沙门菌建立动物模型,通过石蜡切片和HE染色,显微镜观察可见,饲喂沙门菌的小鼠肠绒毛破损,而枯草芽胞杆菌能够调节肠道菌群的变化,肠道病原菌减少,同时还可保护肠黏膜免受损害。本实验为微生态制剂的研发奠定了基础。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:S852.61

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【参考文献】
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