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《吉林农业大学》 2017年
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适于玉米品种鉴定的InDel多重复合检测体系建立

冯博  
【摘要】:我国是农业大国,尤为关注农业生产。玉米是重要的粮饲作物,玉米品种逐年增多,种植面积逐年增大。玉米品种的真实性及纯度鉴定工作尤为重要且工作量较大。随着近年来分子标记技术迅速发展,人们迫切希望将最新的研究成果应用到生产实践工作中去。为了将InDel标记与多重PCR技术同时应用到玉米品种测试中,本试验采用核心引物组合法在10对核心引物的基础上构建20重PCR组合,40重荧光标记毛细管电泳。第一部分:玉米InDel分子标记20重PCR检测体系的建立。为构建玉米多重PCR检测体系,提高分子标记检测效率,本试验借鉴多重PCR在动物及人类上的研究成果探索利用InDel标记构建玉米多重PCR组合。试验中利用10份代表性玉米材料对238对InDel引物进行单重PCR评估,共得到192对扩增效率高、稳定性好的引物。根据软件评估结果、扩增质量、产物范围、染色体均匀分布原则从192对引物中优选出30对综合表现较好的引物形成扩增产物范围在80~200bp和200~400 bp的三组核心引物组合,每套组合中有10对引物分布在不同染色体上。在核心引物组合的基础上综合考虑染色体分布、碱基片段范围、引物荧光颜色,逐一添加引物,最终形成两组玉米20重PCR体系,一组40重荧光标记毛细管电泳。为InDel标记在玉米品种纯度鉴定方面奠定了坚实的基础,也为今后玉米多重PCR体系的建立提供了试验思路。第二部分:特定玉米品种京科968的纯度鉴定。对于不同样品的真实性鉴定来说需要40对引物组合进行鉴定,但进行纯度鉴定则是针对某一具体品种,这时只需要几对多态性高的引物组合即可。所以在做纯度鉴定时可以从40对引物组合中继续挑选出最优的纯度鉴定组合。本试验以京科968为例,从40对引物组合中优中选优挑选了7对适于京科968的最优组合,这套组合稳定性高,对于不同质量的DNA均适用。相比于40对引物来说这7对引物起到了纯度鉴定的作用、提高试验效率、节省试验耗材及试剂。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S513

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