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《吉林农业大学》 2017年
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刺五加苷B对仔猪小肠上皮细胞屏障功能的影响研究

赵宝  
【摘要】:研究表明刺五加在胃肠疾病治疗方面有良好效果,且具有有效促进哺乳母猪肠道发育的功能,并能够促进仔猪的生长[1]。本研究在体外条件下,以仔猪小肠上皮细胞为模型,研究刺五加主要活性单体之一——刺五加苷B(Eleutheroside B)对猪小肠上皮细胞屏障功能的影响。预试验:刺五加苷B作用浓度的确定。本试验在细胞完全培养液的基础上分别添加浓度为0、0.05、0.1、0.2 mg/mL的刺五加苷B后培养IPEC-J2细胞,其中0mg/mL为对照组。应用实时细胞分析仪(RTCA)系统观察不同浓度刺五加苷B作用下48h的IPEC-J2细胞的增殖情况。根据本试验结果本研究选取0.1mg/mL刺五加苷B为添加浓度。试验一:刺五加苷B对仔猪小肠上皮细胞膜通透性的影响。取生长状态相同的猪小肠上皮细胞为实验对象,通过测定0.1mg/mL刺五加苷B培养后的细胞跨上皮电阻(TEER)值和培养上清液的碱性磷酸酶(ALP)活性来反应刺五加苷B对细胞膜通透性的影响。结果显示细胞培养液添加刺五加苷B组显著增加细胞TEER值,且显著降低了细胞培养液中ALP活性,说明刺五加苷B显著降低了IPEC-J2细胞膜的通透性。试验二:刺五加苷B对仔猪小肠上皮细胞紧密连接蛋白及其基因相对表达量的影响。本部分试验分别采用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹方法分别测定0.1mg/mL刺五加苷B对紧密连接Claudin-3、Occludin以及ZO-1的相对表达量的影响。荧光定量PCR结果显示刺五加苷B添加组显著增加Claudin-3、Occludin和ZO-1的mRNA的相对表达量;且Western Bolt结果与其相符合,刺五加苷B组增加了这3种紧密连接的蛋白表达量。试验三:刺五加苷B对仔猪小肠上皮细胞免疫功能的影响。本部分试验采用实时荧光定量PCR方法测定细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α、TGF-β及INF-γ的相对表达量变化。试验结果表明刺五加苷B组增加炎性细胞因子IL-10和TGF-β的mRNA表达量,且减弱促炎性细胞因子IL-6、TNF-α、INF-γ的mRNA表达量。综上,0.1mg/mL的刺五加苷B在体外条件下,对仔猪小肠上皮细胞的增殖、膜通透性的降低、紧密连接的表达以及免疫功能均能起到一定的促进作用,即刺五加苷B能够对仔猪小肠上皮细胞屏障功能起到一定保护作用。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S828.5

【参考文献】
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