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《吉林农业大学》 2017年
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禽流感病毒M2蛋白相互作用宿主蛋白的筛选及初步的功能学研究

金新  
【摘要】:禽流感病毒(Avian Influenza Virus,AIV)基因组至少编码15种病毒蛋白,其中离子通道AM2/M2蛋白是一种多功能病毒蛋白,可以促进病毒样颗粒的形成、调节高尔基体pH值、诱导机体产生抗体,还可影响细胞的自噬功能和激活NLRP3炎性小体等。宿主细胞系统是高度复杂和精密的网络系统,由大量的细胞成分之间的相互作用而形成,病毒劫持这些宿主细胞系统成分,可以导致新的细胞网络系统重新构建来满足它们的复制需求。分析AM2蛋白与宿主蛋白之间的相互作用有助于阐明AIV感染过程中AM2蛋白的作用机制。本文以AM2蛋白为研究对象,通过酵母双杂交筛选获得与之相互作用的宿主蛋白,并利用多种蛋白质相互作用研究技术验证二者的相互作用以及对病毒复制的影响。将不具有毒性与自激活作用的pGBKT7-AM2诱饵质粒与人淋巴细胞cDNA文库进行融合杂交,经过多次筛选与酵母回转实验进一步验证后,确定了两种宿主蛋白与AM2蛋白在酵母细胞中存在相互作用。对初步筛选获得的宿主蛋白基因测序分析后发现,两个蛋白基因分别编码细胞色素C氧化酶亚单位II(COXII)和G蛋白β亚单位2(Gβ2)。异三聚体G蛋白是一类具有GTP结合、水解活性,并能利用大约700多个G蛋白偶联受体(GPCR)进行细胞外信号跨膜转导的重要蛋白,它可以调节细胞增殖、转化、凋亡和趋化等多种细胞功能,同时在炎性疾病和肿瘤中也起到重要的作用。长期以来,人们认为α亚基是G蛋白在受体信号转导中起主导作用的部分,βγ亚基的作用遂被忽视。但Gβγ复合物可以激活多条下游信号通路,包括磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)和MAP激酶(MAPK)等途径,虽然目前关于Gβ的研究报道较多,但其在流感病毒感染方面还未见报道。选择Gβγ复合物中的Gβ2亚基蛋白为靶标,运用GST-Pull down实验和免疫共沉淀实验分别从体外和体内两个方面对Gβ2和AM2蛋白的相互作用进行了验证。同时免疫荧光实验结果也表明Gβ2蛋白和AM2蛋白在细胞内存在相互作用,并且在细胞浆中存在共定位。除了病毒蛋白外,大量的宿主蛋白也参与流感病毒生命周期的每个阶段,因此我们进一步研究了Gβ2蛋白对流感病毒复制的影响。结果发现,流感病毒感染后,Gβ2蛋白的表达水平显著增强。当过表达宿主Gβ2蛋白后,发现病毒的复制水平呈现显著上升趋势;然而,加入Gβγ亚基抑制剂(Gallein)后,病毒的复制水平显著降低。说明AM2蛋白可能通过G蛋白信号通路调控病毒的感染和增殖。综上所述,通过酵母双杂交筛选获得的宿主Gβ2蛋白可以与禽流感病毒AM2蛋白发生特异性相互作用,并且能够促进病毒复制。二者相互作用的研究在分子水平上探索了AM2蛋白的新功能,为进一步研究G蛋白信号通路与流感病毒致病机制的相关性提供必要的依据。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.65

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 李子健;;G蛋白偶联受体信号新调控机制[J];中国病理生理杂志;2015年10期
2 王婷;葛怀娜;郭宏;;酵母双杂交技术应用进展[J];生物技术进展;2015年05期
3 姜云璐;龚磊;白波;陈京;;G蛋白偶联受体与G蛋白相互作用的最新研究进展[J];生命科学;2014年02期
4 陈华青;刘明耀;;G蛋白偶联受体及其信号转导在免疫与炎症中的作用[J];现代免疫学;2009年06期
5 王竞鹏;;G蛋白、G蛋白偶联受体及信号传导途径研究进展[J];医学研究杂志;2006年08期
6 王玉娥,杨汉春;酵母双杂交技术在病毒学研究中的应用[J];中国兽医学报;2004年03期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘绍伟;王洋;田喜凤;;蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素诱饵蛋白质粒构建[J];华北理工大学学报(医学版);2017年06期
2 金新;于洪敏;张茂林;段铭;李影;关振宏;;禽流感病毒AM2蛋白相互作用宿主蛋白的筛选及初步验证[J];中国兽医学报;2017年05期
3 姜云璐;田艳君;王正文;吕志瞳;白波;陈京;;FRET技术研究Apelin受体与G蛋白的相互作用[J];济宁医学院学报;2017年01期
4 赵情;米铁柱;甄毓;石岩;王国善;;诺氟沙星对海月水母螅状体Hsp70基因、GTP结合蛋白基因和氧化应激蛋白基因表达的影响[J];生态毒理学报;2017年01期
5 盛丛;王灵芝;丁海燕;王艳艳;田庚;;G蛋白信号调节蛋白2、5对卵巢癌细胞株HeyA8迁移及侵袭能力的影响[J];中国妇幼保健;2016年16期
6 许媛;李铃仙;魏春茹;魏新燕;于秀梅;刘大群;;小麦Ta-SKP2A克隆及其酵母双杂交诱饵载体的构建[J];华北农学报;2016年02期
7 王婷婷;刘燕;王小琴;邱一华;;胶原诱导性关节炎小鼠脾脏及踝关节中G蛋白耦联受体激酶2的表达[J];南通大学学报(医学版);2016年01期
8 华雯静;;病毒学方法技术的研究进展[J];科教导刊(上旬刊);2013年10期
9 郭文瑞;毛伟;关红;李培锋;;牛磺胆酸对小鼠腹腔巨噬细胞Gsα基因表达的影响[J];中国畜牧兽医;2013年04期
10 马钰;刘兰德;刘方;韩姬;刘明耀;陈华青;;丁酸钠及其G蛋白偶联受体对T淋巴细胞的调节作用[J];现代免疫学;2012年06期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前6条
1 秦发亮;刘文文;李莉;王锡锋;;利用酵母双杂交技术筛选介体灰飞虱中与水稻条纹病毒病害特异蛋白互作的蛋白质[J];中国农业科学;2014年14期
2 李芬;李玉会;吴秀丽;胡岩岩;马瑜;贾盼盼;岳晓杰;李明军;;以p-TEFb为靶点抗HIV药物高通量筛选模型建立及在中药初筛中的应用[J];中草药;2014年05期
3 张菁;李顺东;张勇;杨智;彭小宁;;用酵母双杂交技术筛选DND1相互作用蛋白(英文)[J];湖南师范大学学报(医学版);2011年02期
4 孔建强;沈君豪;黄勇;阮仁余;项斌;郑晓东;程克棣;王伟;;甲型H1N1流感病毒非结构蛋白NS1与人CPSF30结合拮抗剂筛选模型的建立及药物筛选[J];药学学报;2010年03期
5 李先昆;聂智毅;曾日中;;酵母双杂交技术研究与应用进展[J];安徽农业科学;2009年07期
6 欧武,杨翠红,朱千政,邓小艺,于曼,秦鄂德,杨佩英;HCV NS3 N 末端部分氨基酸缺失对NS3/NS3与NS3/NS4A分子间相互作用的影响[J];中华微生物学和免疫学杂志;1998年05期
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1 谢健屏;禽流感病毒[J];中国临床医生;2000年04期
2 周鸿飞;禽流感病毒真面目[J];光明中医;2004年01期
3 ;禽流感病毒分布有明显的地域性相关[J];山东家禽;2004年03期
4 洪水根;各国通力合作 围剿禽流感[J];厦门科技;2004年01期
5 徐瑛;珍爱生命、关注社会、抗击禽流感——7年级生物学课堂实录[J];生物学通报;2004年04期
6 ;低温下的禽流感病毒能存活更长时间[J];饲料与畜牧;2004年06期
7 魏秀俭,李晓鹏;禽流感病毒概述[J];聊城大学学报(自然科学版);2004年03期
8 ;科学与禽流感之间的战争[J];科技资讯;2004年05期
9 ;我国禽流感病毒研究新发现[J];中国牧业通讯;2005年19期
10 范宗理;鸭子可扩大禽流感病毒传播的危险性[J];自然杂志;2005年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孙晓林;;禽流感和公共卫生[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分第12次暨中国动物病理生理学专业委员会第11次学术讨论会论文集[C];2003年
2 何义林;叶冬青;;禽流感病毒对人类感染机制的研究进展[A];第二届全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2008年
3 春阳;李东;;再论“以科学发展观应对禽流感事件”——评禽流感病毒变种两次恐慌论[A];首届中国黄羽肉鸡行业发展大会会刊[C];2008年
4 邓洁丽;段明星;俞初一;江龙;;聚联乙炔有序组装体在识别禽流感病毒方面的应用研究[A];中国化学会第十二届胶体与界面化学会议论文摘要集[C];2009年
5 孙恩泽;谢敏;赵海粟;黄碧海;刘书琳;张万坡;张志凌;王汉中;庞代文;;量子点标记禽流感病毒[A];第六届全国化学生物学学术会议论文摘要集[C];2009年
6 黄志坚;陈强;李清禄;王寿昆;江和基;;不同消毒剂对禽流感病毒的杀灭试验[A];福建省科协第八届学术年会分会场“转变饲养方式,促进海西畜牧业和谐发展”学术年会论文集[C];2008年
7 周祖华;张敏;程礼明;徐彬;沈彩信;;禽流感流行趋势分析[A];全国人畜共患病学术研讨会论文集[C];2006年
8 王志宇;张议文;刘桂林;;禽流感病毒的分子生物学研究进展[A];全国动物生理生化第十一次学术交流会论文摘要汇编[C];2010年
9 刘迎芳;饶子和;;禽流感病毒(H5N1)RNA聚合酶PA亚基相关三维晶体结构与功能分析[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
10 韦婷;胡杰;兰彬;陆文俊;苏凯;覃芳芸;;广西暴发中低毒力禽流感情况报告[A];中国畜牧兽医学会禽病学会分会第十次学术研讨会论文集[C];2000年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 农业部动物疫病诊断与流行病学中心主任 崔尚金 博士;候鸟发生禽流感给我们的警示[N];中国畜牧兽医报;2005年
2 莫书莹;世卫警告:禽流感或大流行全球经济应警惕[N];第一财经日报;2005年
3 本报记者 魏红欣;禽流感“啄”痛全球经济[N];国际金融报;2005年
4 本报记者 许凯;狙击禽流感:一场鸟与人的战争[N];国际金融报;2005年
5 新华社记者 杨爱国;防控禽流感需要加强国际合作[N];光明日报;2005年
6 李杨;禽流感疫情不会长期影响农产品期价[N];金融时报;2005年
7 罗政、夏文辉;香港强化防止禽流感措施[N];人民日报海外版;2004年
8 本报记者 张向永 赵秀芹;禽流感让全世界手牵手[N];市场报;2005年
9 ;禽流感病毒能否绝迹?[N];中国石油报;2004年
10 何源;严防禽流感从境外传入我国[N];中国食品质量报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 邹镇;H5N1型禽流感病毒和甲型H1N1流感病毒致急性呼吸损伤的机理研究[D];北京协和医学院;2012年
2 赵蔚;基于磁分离和荧光量子点标记的高灵敏禽流感病毒检测[D];武汉大学;2012年
3 区嘉贤;H7N9禽流感患者的临床特征及预后分析[D];复旦大学;2014年
4 刘三红;禽流感的数学建模及数值模拟[D];华中师范大学;2015年
5 樊兆斌;野鸟源禽流感病毒(AIV)分离株的遗传进化及其致病性研究[D];东北林业大学;2014年
6 桑晓宇;H9N2亚型禽流感病毒在豚鼠模型中水平传播的分子机制研究[D];中国农业科学院;2015年
7 杨文涛;靶向树突状细胞通用型禽流感病毒重组乳酸菌的研究[D];吉林农业大学;2015年
8 石霖;北方某省主要亚型禽流感现地调查分析及RT-LAMP检测方法研究[D];东北农业大学;2015年
9 张晓剑;HA蛋白糖基化修饰对H5N1亚型禽流感病毒复制、致病性和抗原性的影响[D];扬州大学;2014年
10 朱闻斐;H7N9禽流感病毒致病与传播机制研究[D];中国疾病预防控制中心;2015年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 高晓龙;2014年度中国东部候鸟禽流感病毒分离与鉴定[D];中国农业科学院;2015年
2 徐晓龙;H5和H7亚型禽流感病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立[D];中国农业科学院;2015年
3 韩苗苗;一类人畜共患的禽流感传染病传播模型[D];大连理工大学;2015年
4 王秋珍;H9N2禽流感病毒NS1蛋白诱导的氧化应激促进DF-1细胞凋亡[D];西北农林科技大学;2015年
5 梁威;5株H9N2亚型AIV血凝素结构分析及感染A549细胞的蛋白质组学研究[D];山东农业大学;2015年
6 刘媛媛;MDCK细胞表达鸡ST3GAL I基因对H9亚型禽流感病毒增殖情况的影响[D];河南农业大学;2013年
7 孟芳;H9N2亚型禽流感HA基因演化及其内部基因在H5N2亚型流感病毒演化中的作用[D];山东农业大学;2015年
8 韩雯;山东地区H9N2禽流感流行病学调查及流行毒株分子生物学检测[D];山东农业大学;2014年
9 查国飞;昆虫细胞表达重组H5亚型禽流感HA蛋白及其免疫原性研究[D];安徽农业大学;2014年
10 侯群;新疆青格达湖湿地鸟类中H5、H7亚型AIV和NDV流行病学监测[D];石河子大学;2015年
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