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《吉林农业大学》 2017年
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枯草芽孢杆菌对猪疱疹病毒1型体内外拮抗作用研究

王美玲  
【摘要】:猪疱疹病毒1型是多种哺乳动物共患的伪狂犬病的病原。主要引起母猪生殖障碍、公猪不育、仔猪大量死亡、呼吸困难、瘙痒及神经症状,给畜牧业带来极大的威胁,造成了较大的经济损失。近些年来,变异毒株的出现,使得伪狂犬病的防治变得越发困难。枯草芽孢杆菌作为一种微生态制剂在自然界中普遍存在且安全,可以抑制多种细菌和真菌,但对于枯草芽孢杆菌抗病毒作用的报道较少。因此,本文进行了此方面的研究,希望为枯草芽孢杆菌更广泛地应用于畜牧业生产提供依据。研究经16S rDNA和气相色谱鉴定了一株枯草芽孢杆菌CCBS-1,可以抑制金黄色葡萄球菌及大肠杆菌,从其发酵液中经硫酸铵沉淀法提取蛋白粗提物,甲醇抽提法提取脂肽粗提物,并测定其浓度。将发酵液和两种粗提物用于体外抑制猪疱疹病毒1型试验,经安全浓度测定、阻断、抑制和杀灭等试验,发现发酵液和蛋白粗提物分别在0.042mg/mL和0.167mg/mL浓度下对猪疱疹病毒1型有抑制作用,0.111mg/mL浓度下的脂肽对猪疱疹病毒1型具有杀灭作用。以昆明鼠为试验动物进行枯草芽孢杆菌体内抗病毒试验。选取18g~22g昆明鼠34只,10只用于安全试验测定,其余随机分为3组,设置PBS对照组(PBS组)、枯草芽孢杆菌预防组(BS组)和猪疱疹病毒1型攻毒组(PRV组);预饲喂7d后BS组1.2×108CFU/只/d剂量灌胃枯草芽孢杆菌,PBS组与PRV组灌胃相同剂量的PBS,连续饲喂14天;每隔1d称重1次,试验第7d时分别对PBS组和BS组昆明鼠尾静脉采血,试验14d后PBS组和BS组随机选取4只鼠眼球取血后无菌取脾脏及胸腺进行免疫器官指数的测定,然后取脾细胞依次进行淋巴细胞转化率检测、CD3+CD4+及CD3+CD8+T细胞亚群细胞数量检测、IgG非特异性抗体检测、IL-4、IFN-γ分泌水平检测和NK细胞活性检测,用收集到7d和14d的血清分别进行抗体及IL-4和IFN-γ水平测定,最后对剩余PRV组及BS组鼠进行106.70 TCID50猪疱疹病毒1型脑部攻毒试验,昆明鼠死后及时取脑组织制作病理切片。结果表明:(1)饲喂枯草芽孢杆菌对昆明鼠体重的影响表明BS组体重明显升高;(2)对于昆明鼠胸腺指数和脾脏指数而言,BS组的胸腺指数极显著高于PBS组,但其脾脏指数与PBS组差异不显著;(3)两组非特异性抗体水平都呈上升趋势,14d较7d BS组非特异性抗体水平有所增长,且极显著高于PBS组;(4)BS组在非特异性刺激剂作用下刺激指数高于PBS组;(5)BS组CD3+CD4+、CD3+CD8+T淋巴细胞数量与PBS相比差异显著;(6)BS组NK细胞活性显著高于PBS组,NK细胞活性提高25%左右;(7)BS组血清和细胞上清中IL-4和IFN-γ含量都显著高于PBS组;(8)BS组攻毒保护率提高25%;(9)病理切片中攻毒组具有明显的水肿、出血及炎性浸润等现象。从以上研究结果可知,枯草芽孢杆菌CCBS-1株的发酵液成分对猪疱疹病毒1型具有一定的抑制作用,该菌可提高实验鼠的体液免疫和细胞免疫能力,对伪狂犬病具有一定的预防作用。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.65

【参考文献】
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