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《吉林农业大学》 2018年
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大熊猫犬瘟热病毒受体(SLAM/CD150)转基因小鼠的制备、鉴定与应用

崔莹  
【摘要】:犬瘟热(Canine distemper,CD)是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)引起的急性、高度接触性传染病。近年来,CDV的感染宿主范围不断扩大,曾造成7只大熊猫感染死亡,被认为是“头号杀手”,给大熊猫的保护工作带来极大的挑战。大熊猫是我国的珍稀濒危野生动物,不适合开展大规模、风险系数大的动物实验,急需建立一种能够从某种程度上代替大熊猫用于科学研究的小鼠疾病模型。CD150是CDV与宿主细胞相互识别过程中十分重要的细胞表面分子。本课题基于转基因技术成功制备了表达大熊猫CD150的转基因小鼠,并对该转基因小鼠的基因型及表型进行鉴定。在此基础上,将大熊猫源CDV分离株接种转基因小鼠建立感染动物模型。构建一种表达大熊猫CD150分子的转基因小鼠可为CDV感染大熊猫的相关机制研究和疫苗研发工作提供一种可靠的小动物模型。第一部分:大熊猫CD150转基因小鼠的制备与鉴定。本研究将携有大熊猫CD150基因的重组质粒(pIRES-gpSLAM-eGFP)线性化后注射到小鼠受精卵中,然后将受精卵移植到代孕母鼠输卵管中。代孕母鼠妊娠期满产仔后,提取子代小鼠的基因组,通过PCR方法鉴定子代小鼠基因型。我们已成功获得Founder小鼠12只,其中阳性Founder小鼠2只,阳性率为16.67%。将两只Founder小鼠分别与野生型小鼠进行杂交后,共获得F1代小鼠58只,其中32只为阳性小鼠,阳性率为55.17%。对F1代小鼠进行基因型鉴定后,我们还采用RT-PCR(反转录PCR)、Western blotting和定量PCR(Real-time qPCR)方法对大熊猫CD150基因在转基因小鼠全身组织的表达情况进行了检测。结果表明,CD150基因主要表达在转基因小鼠肺、心、肾、肠、气管等组织。我们已成功构建表达有大熊猫CD150的转基因小鼠,且大熊猫CD150基因能够在转基因小鼠中稳定表达并遗传。第二部分:大熊猫CD150转基因小鼠的CDV感染效率评估。将构建的F1代转基因小鼠采用滴鼻方式感染大熊猫源CDV分离株(giant panda/SX/2014)50μL/只(10~4TCID_(50)/mL)。攻毒感染后每3天记录一次小鼠体重,7天、21天采集全血、肺灌洗液、腹腔洗液样本,进行RT-PCR、Real-time qPCR检测。RT-PCR和Real-time qPCR检测结果表明,在攻毒感染第7天,阳性转基因小鼠的肺灌洗液为CDV阳性,阴性转基因小鼠未检出;第21天,阳性转基因小鼠的全血、肺灌洗液、腹腔洗液中均为CDV阳性。所有小鼠攻毒感染后的体重变化均不显著。以上实验结果说明表达大熊猫CD150的转基因小鼠与病毒的结合效率有明显增加,加速病毒感染过程。综上所述,该研究成功建立了大熊猫CD150转基因小鼠的感染模型并系统评估了转基因小鼠的实用价值,为后续大熊猫的科学研究工作提供了动物评价模型。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S852.65

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 周莉;吴亨进;浦同灿;胡尚;贾惠珺;;浅谈犬瘟热疫苗研究进展[J];中国畜禽种业;2014年05期
2 苏建青;褚秀玲;;犬瘟热病毒细胞受体研究进展[J];中国畜牧兽医;2011年04期
3 鞠会艳;乔军;高玉伟;杨松涛;夏咸柱;;犬瘟热病毒小熊猫株核蛋白和融合蛋白基因克隆及序列分析[J];东北农业大学学报;2010年05期
4 郝捷,冯波;转基因动物研究进展[J];动物医学进展;2004年01期
5 林雪玲,顾万军;转基因动物研究概述[J];佛山科学技术学院学报(自然科学版);2003年04期
6 高凤山,胡桂学,夏咸柱,柏亚铎,余春,乔军;联合PCR诊断大熊猫犬瘟热和犬冠状病毒的混合感染[J];吉林农业大学学报;2003年01期
7 钟红梅,刘越华,徐海山;转基因动物研究进展及应用[J];西南民族学院学报(自然科学版);2002年03期
8 姚俊岩,安靓,李进;建立转基因动物的方法及其进展[J];第一军医大学学报;2002年01期
9 熊焰,徐志文,王印,谢幼新,郑先春,邓芸,吴登虎;小熊猫犬瘟热病及病原研究[J];动物医学进展;2001年03期
10 陈付学,郭琴;转基因动物应用的研究进展[J];榆林高等专科学校学报;2001年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈宏;张博文;周扬;黄永震;;中国肉牛繁殖技术的演变[J];中国牛业科学;2015年06期
2 陈宏;黄永震;周扬;党永龙;;中国肉牛育种技术演变[J];中国牛业科学;2015年04期
3 王莉;王秋菊;;听神经病谱系障碍转基因小鼠模型的研究进展[J];中华耳科学杂志;2015年02期
4 王强;严悦;邓家波;牛李丽;余建秋;尹萌萌;张义正;谭雪梅;;大熊猫白细胞介素-18的原核表达及免疫功能分析[J];中国兽医科学;2014年10期
5 周莉;吴亨进;浦同灿;胡尚;罗时霞;贾惠珺;何仕健;;犬瘟热疫苗研究进展[J];贵州畜牧兽医;2014年03期
6 徐素慧;高洋;赵玄多;邵良平;陈玉村;陈德坤;;原核表达小熊猫IFN-γ的免疫活性研究[J];动物医学进展;2014年05期
7 周莉;吴亨进;浦同灿;胡尚;贾惠珺;;浅谈犬瘟热疫苗研究进展[J];中国畜禽种业;2014年05期
8 李世宗;徐麟木;;小熊猫接种犬瘟热弱毒疫苗的效果分析[J];野生动物;2012年05期
9 曾智勇;周莉;刘志杰;;犬瘟热病毒贵州株(CDV-GZ1)F基因的克隆及序列分析[J];中国畜牧兽医;2012年06期
10 王磊;李天松;刘玉秀;冯娜;王照;姜雪;王胜乐;许微微;王铁成;赵永坤;杨松涛;黄耕;高玉伟;夏咸柱;;犬瘟热病毒小熊猫株反向遗传系统的构建及其鉴定[J];兽类学报;2012年02期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 鞠会艳;乔军;高玉伟;杨松涛;夏咸柱;;犬瘟热病毒小熊猫株核蛋白和融合蛋白基因克隆及序列分析[J];东北农业大学学报;2010年05期
2 苏凤艳;宗春苗;王卓聪;王春雨;王全凯;;水貂株犬瘟热病毒F基因工程疫苗的免疫特性研究[J];上海交通大学学报(农业科学版);2010年02期
3 赵清;李冬;;病毒受体及其研究现状[J];动物医学进展;2009年07期
4 赵建勇;独军政;高闪电;丛国正;林彤;邵军军;伏小平;常惠芸;;硫酸乙酰肝素受体介导的病毒感染作用[J];中国人兽共患病学报;2008年09期
5 张淑琴;马学恩;周建华;;病毒受体研究进展[J];中国预防兽医学报;2008年07期
6 赵建军;闫喜军;吴威;;犬瘟热病毒基因变异及其细胞受体研究进展[J];微生物学报;2008年07期
7 独军政;常惠芸;高闪电;才学鹏;;病毒受体及其研究方法进展[J];生物技术通讯;2007年05期
8 王洪斌;;病毒结合受体后对信号转导的影响[J];生物学通报;2007年01期
9 丁天兵;任君萍;马文煜;;病毒受体的研究方法[J];Virologica Sinica;2006年02期
10 崔保安,王莉娟,赵楠,祁小乐;转基因动物关键技术及其进展[J];河南畜牧兽医;2003年04期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李艳秋;宁华;;转基因小鼠库的建立与优化[J];湖北第二师范学院学报;2014年08期
2 赵四海;楚雍烈;郑华东;杨鹏辉;陈正兰;朱虹;范江霖;刘恩岐;;过氧化物酶增殖体激活受体γ2转基因小鼠的制作及其影响因素分析[J];西安交通大学学报(医学版);2007年02期
3 王醒,李鹏,陈兰英;放免法同时测定糜酶转基因小鼠心脏中血管紧张素转换酶及糜酶样活性[J];基础医学与临床;2000年03期
4 刘光泽,熊一力,贾彦征,王洪敏;乙型肝炎病毒转基因小鼠树突状细胞提呈功能的初步研究[J];中西医结合肝病杂志;2000年06期
5 胡以平;转基因小鼠——生命科学研究的新体系[J];自然杂志;1990年01期
6 汪兆琦,章静波;转基因小鼠的研究及其遗传学意义[J];国外医学.遗传学分册;1987年04期
7 焦庆安;;人类功能性白细胞介素2受体在轻链/Tac转基因小鼠中的表达[J];国外医学(卫生经济分册);1988年05期
8 李来记;;转基因小鼠——一种新型实验动物[J];上海实验动物科学;1989年04期
9 Alan W.Harris;杨仁池;;Eμ—myc转基因小鼠:一种高发生率的自发性淋巴瘤和早期B细胞白血病模型[J];北京实验动物科学;1989年04期
10 戴一凡;;用精子作为载体制做转基因小鼠[J];国外医学(分子生物学分册);1989年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王冬梅;李万波;袁树民;全雄志;张海涛;马春梅;曹兴水;张连峰;;APP695K595N/M596L突变转基因小鼠建立和病理表型动态分析[A];2011全国老年痴呆与衰老相关疾病学术会议第三届山东省神经内科医师(学术)论坛论文汇编[C];2011年
2 訾晓渊;张南;熊俊;巴月;姚玉成;黄洁;李建秀;朱海英;王新民;马凤云;张树忠;胡以平;;乙型肝炎病毒全基因组转基因小鼠的生物学特性[A];中国细胞生物学学会2005年学术大会、青年学术研讨会论文摘要集[C];2005年
3 邓丹丹;;26周转基因小鼠致癌试验的设计与实施——科文斯上海公司[A];2016年第六届全国药物毒理学年会论文集[C];2016年
4 刘超;崔莹;李冰;谢英;;转人DPP4的转基因小鼠模型的构建与鉴定[A];第十三届中国实验动物科学年会论文集[C];2017年
5 宁云山;周明乾;王小宁;黄淑帧;曾溢滔;;重组人血小板生成素在转基因小鼠乳腺中的表达研究[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
6 李洪德;魏泓;唐惠儒;王玉兰;;EGFP转基因小鼠的代谢组学研究[A];第十七届全国波谱学学术会议论文摘要集[C];2012年
7 魏振;潘晓东;;5XPAD转基因小鼠Aβ高负荷环境可能加速海马组织衰老[A];中华医学会第十七次全国神经病学学术会议论文汇编(上)[C];2014年
8 黄黎珍;刘光泽;李秀梅;胡莲美;顾为望;;HBV蛋白在乙肝转基因小鼠中的表达研究[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
9 张晓亮;柳洁;;不同浓度同型半胱氨酸对转基因小鼠足细胞凋亡的影响[A];中华医学会糖尿病学分会第十六次全国学术会议论文集[C];2012年
10 李国才;孙强;孙怀昌;陈刚;张泉;施伟庆;李厚达;;乳腺高效表达人溶菌酶转基因小鼠的制备[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 黄每裕;白老鼠生了一窝“黑小子”[N];中国医药报;2002年
2 记者 冯卫东;可植入小鼠头部的迷你显微镜问世[N];科技日报;2008年
3 于明山;转基因小鼠研制成功为克隆器官提供基础[N];中国高新技术产业导报;2003年
4 ;我国学者成功建立一套转基因小鼠系统[N];中国医药报;2002年
5 何屹;英培育出能患感冒的转基因小鼠[N];科技日报;2008年
6 吕 恕 黄美怡 常 萱 Kara Stark;应用ATM转基因小鼠作为中医药肿瘤动物模型的实验研究[N];中国中医药报;2004年
7 YMG记者 李仁;科技创新激活发展新动力[N];烟台日报;2012年
8 孔琪 张连峰;小动物 大作为[N];健康报;2010年
9 常丽君;日生物学家培育出“唱歌”鼠[N];科技日报;2010年
10 常丽君;美发现物理压力形成伤疤的分子机理[N];科技日报;2011年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 董玉霞;APP/PS1双转基因小鼠脑白质形态学改变及MBP、MCT1-RNA表达异常的实验研究[D];中国医科大学;2018年
2 张林林;PRRSV易感转基因细胞株和小鼠模型的构建及分析[D];中国农业大学;2016年
3 杨希;猪β防御素2转基因小鼠和猪的制备与抗病性评价[D];华中农业大学;2015年
4 吉盈肖;IGF1减轻ALS-SOD1~(G93A)转基因小鼠坐骨神经炎症的研究[D];河北医科大学;2018年
5 刘建忠;转基因小鼠乳腺表达人瘦蛋白的研究[D];华中农业大学;2000年
6 李巍;天然抗角蛋白自身抗体转基因小鼠的建立及相关研究[D];第四军医大学;2004年
7 李端;拉米夫定和干扰素α对孕期降低HBV转基因小鼠血中HBV载量有效性和安全性的初步研究[D];第四军医大学;2004年
8 崔芳;HBV转基因小鼠的肝脏蛋白质组学研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
9 张志宏;异种器官移植用血管内皮细胞组织特异性表达人DAF、CD59转基因小鼠的研究[D];天津医科大学;2004年
10 訾晓渊;乙型肝炎病毒全基因组转基因小鼠的生物学特性研究[D];第二军医大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 齐银矿;JAK2/p-JAK2在ALS转基因小鼠发病过程中表达的研究[D];河北医科大学;2018年
2 肖昆太;人羊膜间充质干细胞静脉移植对ALS转基因小鼠免疫炎症调节作用研究[D];南方医科大学;2018年
3 陈婧菲;题目一 APP/PS1/LC3三转基因小鼠的构建及其自噬流动态变化研究 题目二 雷帕霉素对阿尔茨海默病的保护作用及其机制初探[D];重庆医科大学;2018年
4 涂杰;A53T α-Syn和G2019S LRRK2转基因小鼠的PD相关表型及机制分析[D];苏州大学;2018年
5 李毅;光遗传学方法激活DRG内GABA能回路对疼痛外周传递的影响[D];河北医科大学;2016年
6 刘录;靶向血小板凝血因子Xa转基因小鼠的建立及功能鉴定[D];杭州师范大学;2018年
7 周国丽;FoxO1?DBD对瘦素作用的影响[D];河南农业大学;2018年
8 崔莹;大熊猫犬瘟热病毒受体(SLAM/CD150)转基因小鼠的制备、鉴定与应用[D];吉林农业大学;2018年
9 崔婧;力竭干预对CAMR_TG转基因小鼠心脑血管健康的影响[D];陕西师范大学;2017年
10 付明阳;miR-31转基因小鼠的构建及应用[D];山西医科大学;2018年
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