收藏本站
《吉林农业大学》 2018年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

kisspeptin促进牛颗粒细胞凋亡机制研究

刘红羽  
【摘要】:细胞凋亡是维持机体内环境平衡、排出机体不必要、有害细胞等的过程,又称为程序性死亡。哺乳动物卵巢卵泡发育过程中,卵巢上所有的卵泡都要经历退化、闭锁的过程,只有少数卵泡发育成熟。颗粒细胞在卵泡发育过程中发挥关键作用,并且与卵泡闭锁等过程密切相关。Kisspeptins(Kp)是由KiSS-1基因编码的肽类激素,通过G蛋白偶联受体(G protein-couple receptor-54)GPR54发挥作用。Kp通过调节下丘脑GnRH分泌,影响促卵泡素和促黄体素的分泌,在下丘脑、肝、胰、胎盘、卵巢等组织中有表达。本实验室前期研究发现,Kp在牛卵巢颗粒细胞上有表达,并能促进牛颗粒细胞凋亡,但其调控机制尚不清楚。本试验选用100 nM的kp-10处理牛颗粒细胞24 h,利用miRNA-mRNA测序关联分析技术筛选参与kisspeptin促进牛颗粒细胞凋亡的miRNA及其靶基因。根据miRNA-mRNA联合分析结果,获得114个差异表达的mRNAs,61个差异表达的miRNAs,2438个GO富集功能差异的miRNA-mRNA,9个差异显著的KEGG信号通路。荧光定量PCR法验证部分差异表达的miRNA和mRNA表达量,结果与miRNA-mRNA联合分析测序技术基因表达结果趋势相同,证明高通量结果的准确性。根据miRNA-mRNA联合分析结果发现,miR-27b与SFRP2可能参与Kp对牛颗粒细胞凋亡的促进作用。利用双荧光素酶试验明确miR-27b与SFRP2的靶向关系。成功构建了SFRP2基因3’-UTR端的重组型及突变型载体,选用psiCHECK-2质粒,构建psiCHECK-2-SFRP2-3’-UTR、psiCHECK-2-mut-SFRP2-3’-UTR重组载体质粒,成功转染到293T细胞,通过检测萤火虫及海肾型荧光素酶的活力比值,明确了SFRP2与miR-27b的靶向关系。miR-27b能与SFRP2-3’UTR端靶标位点结合,抑制转录后SFRP2的表达,荧光定量PCR法进一步验证miR-27b与SFRP2靶向关系,证实SFRP2是miR-27b的靶基因。利用流式细胞术、荧光定量PCR法和细胞转染等技术研究kisspeptin与miR-27b及其靶基因SFRP2在调节牛颗粒细胞凋亡中的关系,揭示kisspeptin调控牛颗粒细胞凋亡的机制。研究发现,miR-27b mimic促进颗粒细胞增殖,抑制颗粒细胞凋亡,miR-27b inhibitor促进牛颗粒细胞凋亡(P0.05),提示miR-27b可抑制牛颗粒细胞凋亡;miR-27b mimic与kp-10共同作用促进牛颗粒细胞凋亡,miR-27b inhibitor与kp-10共同作用显著促进牛颗粒细胞凋亡。流式细胞术显示SFRP2 siRNA显著抑制牛颗粒细胞凋亡,促凋亡基因caspase-3表达量显著下降,抗凋亡基因Bcl-2基因表达量显著升高。miR-27b mimic与SFRP2 siRNA共同作用抑制颗粒细胞凋亡,miR-27b inhibitor与SFRP2 siRNA共同作用促进牛颗粒细胞凋亡(P0.05)。本试验结果表明,Kp通过miR-27b靶向SFRP2基因表达调节而促进牛颗粒细胞凋亡。研究结果不仅揭示了kisspeptin调控牛颗粒细胞凋亡的分子机制,而且丰富了牛颗粒细胞凋亡的调控网络。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S823

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 徐庚全;樊江峰;杨世华;李谷月;赵华山;余四九;;FSH、LH对体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞凋亡及E_2、P分泌功能的影响[J];畜牧兽医学报;2015年06期
2 李丹波;徐细明;;miR-27b通过c-MET抑制胃癌细胞的生长、增殖及侵袭转移[J];现代肿瘤医学;2015年01期
3 赵静;王军;;KiSS-1/GPR54系统在卵巢中的表达及其功能研究进展[J];中国畜牧杂志;2014年21期
4 叶娜;董晓英;李冬华;;卵巢早衰的颗粒细胞凋亡机制研究进展[J];首都医科大学学报;2014年03期
5 兰道亮;熊显荣;林宝山;陈亚冰;胡敏;苏小珊;李键;;基于微量RNA高通量测序技术的牦牛MⅡ期卵母细胞转录组研究[J];畜牧兽医学报;2014年05期
6 张诗蒙;刘非;尹小毛;郑磊;王前;;miRNA-27b抑制PPARγ促进乳腺癌细胞增殖[J];实用医学杂志;2014年08期
7 陈超;李万宏;孙丽娜;陈树雄;陈璐;李纯锦;周虚;;miRNA-205在猪卵母细胞成熟过程中表达规律及其调控作用的研究[J];中国畜牧兽医;2014年04期
8 兰道亮;熊显荣;位艳丽;徐通;钟金城;字向东;王永;李键;;基于RNA-Seq高通量测序技术的牦牛卵巢转录组研究:进一步完善牦牛基因结构及挖掘与繁殖相关新基因[J];中国科学:生命科学;2014年03期
9 王军;孙蕾;周海柱;张涛;徐晶;娄玉杰;;日粮低营养对母羊下丘脑KiSS-1/GPR54系统表达及相关激素分泌的影响[J];畜牧兽医学报;2013年12期
10 赵丹懿;宋磊;李曼奇;李娜;;肝细胞癌中miR-92a的表达及其对HepG2细胞凋亡的影响[J];现代生物医学进展;2013年20期
中国博士学位论文全文数据库 前6条
1 黄炳昆;脂多糖通过降低下丘脑Kisspeptin-GPR54系统表达抑制性腺轴功能和GnRH脉冲治疗男性IHH生精疗效分析[D];北京协和医学院;2015年
2 汪亦男;KLF4和miR27b在血管疾病中的功能和分子机制的研究[D];南方医科大学;2015年
3 甄艳红;MAPK-CEBPβ对猪颗粒细胞凋亡、周期及类固醇激素分泌的调控作用和机制的研究[D];华中农业大学;2014年
4 刘非;HPV16 E7调控MicroRNA-27b影响宫颈癌细胞增殖和凋亡的机制研究[D];南方医科大学;2014年
5 周晓龙;FSH调控小鼠卵泡闭锁及卵泡颗粒细胞Cyp1b1基因表达机制[D];南京农业大学;2013年
6 段伦喜;BMP-2对肝癌HepG-2细胞增殖和凋亡的作用机制研究[D];中南大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前6条
1 黄立林;MicroRNA-130a/16/381在猪卵巢颗粒细胞中的表达和功能研究[D];华中农业大学;2016年
2 徐金影;MiR-27b通过PPAR-γ抑制软骨细胞肥大化作用的研究[D];吉林大学;2016年
3 郭威;Kisspeptin参与多嚢卵巢综合征患者颗粒细胞孕激素分泌的调节[D];郑州大学;2015年
4 翟君钰;Kisspeptin与卵巢功能及排卵的关联性研究[D];山东大学;2014年
5 李谷月;FSH诱导体外培养的天祝白牦牛卵泡颗粒细胞凋亡及其对调控基因Fas/FasLmRNA表达的影响[D];甘肃农业大学;2013年
6 彭婧;Kisspeptin/GPR54对大鼠卵巢黄体细胞内分泌功能的影响及其机理[D];南昌大学;2012年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 郭红宝;南阳;甄英伟;王乐;张亚辉;周西广;周俊虎;韩磊;黄强;俞凯;钟跃;;微小RNA-451对LN229胶质瘤细胞系侵袭和迁移的影响[J];中华神经医学杂志;2016年06期
2 姜福星;魏丕伟;寇亚平;贾茵;陈其兵;;台湾金线莲转录组特性研究[J];分子植物育种;2015年12期
3 欧江涛;梁慧星;赵卫红;张思源;柴志欣;钟金城;;牦牛非编码RNA及在遗传学中的教学初探[J];中国草食动物科学;2015年06期
4 王永霞;马娜;钟兴明;崔蓉;王小兰;杨宁;苗竹林;;Caspase-3、TNF-α、bcl-2、bax在人胎儿卵巢中的表达[J];中国医药导报;2015年31期
5 于梅;覃柳巧;迟继铭;苑天彤;刘春光;张岩岩;宋兰艳;姜国华;;地黄菟丝调经颗粒对环磷酰胺致POF大鼠GnRHR蛋白表达的影响[J];中医药学报;2015年05期
6 姜福星;江欣燕;吴生;杨丽娟;李文骥;陈其兵;;虎眼万年青鳞茎转录组特性分析[J];分子植物育种;2015年09期
7 白利青;乔佳妮;;肝细胞癌患者GGT和甲胎蛋白的表达水平及相关性分析[J];临床肝胆病杂志;2015年09期
8 王乐乐;张燕军;李晓燕;苏蕊;王瑞军;王志新;李金泉;;下一代测序技术在畜禽转录组研究中的应用[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2015年09期
9 孟宪然;杜琛;王静;付绍印;郑竹清;张文广;李金泉;;基于RNA-Seq识别山羊肉品质候选基因[J];畜牧兽医学报;2015年08期
10 符小航;符海鸽;贺丰杰;车虹彩;杨鉴冰;崔晓萍;;基于卵泡颗粒细胞凋亡研究归肾育宫汤对免疫性卵巢早衰小鼠的治疗作用[J];陕西中医;2015年08期
中国博士学位论文全文数据库 前2条
1 刘红羽;kisspeptin促进牛颗粒细胞凋亡机制研究[D];吉林农业大学;2018年
2 黄正洋;表皮生长因子参与鹅卵泡颗粒细胞增殖调控机理的研究[D];扬州大学;2016年
中国硕士学位论文全文数据库 前9条
1 朱韶华;不同绵羊品种BMP-15基因的SNPs和mRNA及其与产羔性状的相关性分析[D];甘肃农业大学;2018年
2 叶小琳;牦牛CLDN3基因特征及FSH对CLDN3、CLDN11在睾丸支持细胞表达的影响[D];甘肃农业大学;2018年
3 罗璇;儿童青少年青春期发育年代趋势及与肥胖相关性的研究[D];重庆医科大学;2018年
4 张艳婷;不同卵巢储备功能促排卵过程中Kp变化及与COH结局相关分析[D];河北医科大学;2018年
5 邢晶晶;Kisspeptin、GPR54和LIF在反复移植失败患者植入窗期子宫内膜表达的研究[D];郑州大学;2017年
6 陈阳;寿胎丸对肾虚—黄体功能不全性流产大鼠kisspeptin-10的影响[D];重庆医科大学;2017年
7 袁媛;kisspeptin与早期不明原因流产的相关性研究[D];山西医科大学;2016年
8 吕鹏;牦牛HSPA12B基因的克隆及其在体外受精胚胎中的定位表达[D];甘肃农业大学;2016年
9 杨贺佳;RIF患者血清中的Kisspeptin浓度及子宫内膜上KISS1、KISS1R基因的表达[D];郑州大学;2016年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王军;孙蕾;周海柱;张涛;徐晶;娄玉杰;;日粮低营养对母羊下丘脑KiSS-1/GPR54系统表达及相关激素分泌的影响[J];畜牧兽医学报;2013年12期
2 吴楠;;妇产科专业发展趋势与设想[J];解放军医药杂志;2013年11期
3 李鹏飞;岳文斌;庞钰莹;于雪静;黄洋;任有蛇;吕丽华;;FSH和胰岛素对绵羊卵巢卵泡颗粒细胞体外培养的影响[J];畜牧兽医学报;2013年09期
4 王军;孙蕾;周海柱;李琳;吕文发;;发情周期不同阶段KiSS-1和GPR54 mRNA在小尾寒羊卵巢上表达规律的研究[J];中国畜牧杂志;2012年21期
5 刘炼;杨波;姜孝新;黄菊芳;;冷极射频序贯索拉非尼与索拉非尼单药治疗进展期肝细胞癌的对比研究[J];肿瘤药学;2012年05期
6 黄胜蓝;郑长黎;;与胃癌发生相关MicroRNA的研究新进展[J];现代生物医学进展;2012年24期
7 李花;赵新广;刘丹卓;;卵巢早衰病理因素研究现状及展望[J];中医药导报;2012年08期
8 张鹏;杜占惠;吕红娟;;山东地区汉族人群中HLA-A、-B、-DRB1等位基因与原因不明卵巢早衰相关性研究[J];中国优生与遗传杂志;2012年08期
9 王军;孙蕾;张涛;周海柱;娄玉杰;;Kisspeptin在初情期前母羊下丘脑的分布定位[J];中国农学通报;2012年20期
10 常征;张爱民;郝俊文;徐友和;刘毅;;miR-221通过作用DVL2影响前列腺癌细胞系的侵袭功能[J];现代生物医学进展;2012年15期
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 杨静;VEGF靶向抗体研制及其促肿瘤分子机制探讨[D];中国人民解放军军事医学科学院;2014年
2 孔小岑;糖皮质激素通过miR-27b调控白色脂肪棕色化功能的分子机理研究[D];南京医科大学;2013年
3 刘洁琼;PDGF-D在乳腺癌进展、转移及化疗药物运输中的作用和机制研究[D];中南大学;2011年
4 林鹏飞;猪有腔卵泡发育与闭锁的内分泌及分子细胞学变化研究[D];南京农业大学;2010年
5 何小龙;蒙古羊BMPR-IB、FSHβ基因克隆与表达及卵巢组织差异表达基因研究[D];内蒙古农业大学;2010年
6 杨世华;几种生殖激素对体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞凋亡的影响[D];甘肃农业大学;2002年
7 姜勋平;抑制素和bcl-2基因免疫对小鼠繁殖和生长的影响[D];南京农业大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 但意;MiRNA-130a在小鼠卵泡发育过程中的表达和对颗粒细胞增殖和凋亡的影响[D];华中农业大学;2014年
2 李倩;mir-381在小鼠卵泡不同发育阶段的表达及其对颗粒细胞的影响[D];华中农业大学;2014年
3 菅瑞珍;Ghrelin在绵羊颗粒细胞拟黄体化过程中的作用[D];内蒙古农业大学;2013年
4 刘萍;KISS-1基因在母猪初情期下丘脑—垂体—卵巢轴中的定位和发育性变化[D];扬州大学;2008年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 卫莹;周颖;凌斌;;颗粒细胞凋亡机制的研究现状[J];中国妇幼保健;2010年22期
2 李庆雷,倪江,边淑玲,吴克飞;神经酰胺对大鼠离体培养颗粒细胞凋亡的影响[J];哈尔滨医科大学学报;2000年03期
3 曹义娟;;人卵颗粒细胞凋亡对卵母细胞发育潜能的影响[J];中国妇幼保健;2012年30期
4 曹义娟;;颗粒细胞凋亡对卵母细胞发育潜能的影响[J];实用临床医药杂志;2008年13期
5 李媛,曹义娟,姜晶晶,马水英,李梅,胡京美,陈子江;卵母细胞发育潜能与颗粒细胞凋亡关系的初步研究[J];生殖医学杂志;2005年01期
6 尤劲松,胡随瑜;地贞颗粒对幼鼠卵泡颗粒细胞凋亡的影响[J];湖南中医学院学报;2001年01期
7 尤劲松,胡随瑜;卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡[J];国外医学(生理、病理科学与临床分册);2000年06期
8 王立强;郑宇新;张妮娜;李青旺;江中良;;牛卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡基因表达研究[J];家畜生态学报;2016年12期
9 吴成勇;;颗粒细胞凋亡机制与多囊卵巢综合征[J];中国医药导报;2008年13期
10 陈秀萍;姜勋平;丁家桐;;鹅卵泡颗粒细胞凋亡及其与生殖激素间的关系[J];畜牧兽医学报;2006年10期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 郝丽;严云勤;;乙醇对大鼠卵巢及其颗粒细胞凋亡的影响[A];第九次全国生殖生物学学术研讨会论文摘要集[C];2003年
2 温鑫;高磊;王爱华;靳亚平;;CREBZF/Zhangfei对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的调控作用和分子机制的研究[A];中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十三次学术研讨会论文集[C];2016年
3 杨书红;罗爱月;王世宣;;颗粒细胞凋亡在卵泡闭锁中的研究进展[A];中华医学会第三次全国绝经学术会议暨绝经相关问题学习班论文汇编[C];2011年
4 黄丽丽;张武文;韦浪花;庄亚玲;;低剂量米非司酮对人卵巢颗粒细胞凋亡的影响[A];首届沪浙妇产科学术论坛暨2006年浙江省妇产科学学术年会论文汇编[C];2006年
5 郭庆云;黄丽丽;张武文;韦浪花;庄亚玲;;低剂量米非司酮对人卵巢颗粒细胞凋亡的影响[A];首届沪浙妇产科学术论坛暨2006年浙江省妇产科学学术年会论文汇编[C];2006年
6 李媛;曹义娟;陈子江;马水英;李梅;胡京美;姜晶晶;;卵子发育潜能与颗粒细胞凋亡之间的关系[A];第八次全国妇产科学学术会议论文汇编[C];2004年
7 王晓丽;杨娟;陈玉;成俊萍;潘红平;韦精卫;陆凤花;石德顺;;水牛卵丘颗粒细胞凋亡与卵母细胞体外发育潜能的研究[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2008年
8 张武文;黄丽丽;韦浪花;庄亚玲;;低剂量米非司酮对人卵巢颗粒细胞凋亡的影响[A];2005年浙江省妇产科学暨计划生育学术会议论文汇编[C];2005年
9 王楠;赵璠;靳亚平;;Xbp1对小鼠颗粒细胞凋亡、周期及类固醇激素分泌的调控作用[A];中国畜牧兽医学会兽医产科学分会第十三次学术研讨会论文集[C];2016年
10 杨静玉;吴春福;阿部和穗;松林则夫;;油酸酰胺对低钾诱发的培养大鼠小脑颗粒细胞凋亡的抑制作用[A];第九届中国神经药理学术会议论文摘要集[C];2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘红羽;kisspeptin促进牛颗粒细胞凋亡机制研究[D];吉林农业大学;2018年
2 胡长龙;I_A钾离子通道与大鼠小脑颗粒细胞凋亡关系的研究[D];复旦大学;2005年
3 刘忠华;猪卵泡颗粒细胞凋亡及几种影响因素的研究[D];东北农业大学;2000年
4 刘吉英;miR-26b调控猪卵泡颗粒细胞凋亡机制[D];南京农业大学;2016年
5 申明;Foxo1对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的调控研究[D];南京农业大学;2014年
6 杨世华;几种生殖激素对体外培养的牦牛卵泡颗粒细胞凋亡的影响[D];甘肃农业大学;2002年
7 陈风雷;HERP在小鼠卵泡颗粒细胞凋亡中的作用及其机制研究[D];西北农林科技大学;2016年
8 贺亚媚;褪黑素对猪卵泡发育与闭锁的影响研究[D];西北农林科技大学;2017年
9 马雯雯;补肾活血法对卵巢早衰和控制性超促排卵着床障碍模型小鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响[D];华中科技大学;2017年
10 刘海萍;祛瘀解毒法对子宫内膜异位症患者及大鼠卵丘颗粒细胞凋亡与分泌影响的研究[D];山东中医药大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 温鑫;CREBZF/Zhangfei在小鼠卵巢颗粒细胞凋亡调控中的作用[D];西北农林科技大学;2017年
2 郝丽;乙醇对大鼠卵巢及其颗粒细胞凋亡的影响[D];东北农业大学;2003年
3 刁书永;镉对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡及相关基因表达影响的研究[D];湖南农业大学;2005年
4 李彩萍;生殖激素对体外培养的水牛卵泡颗粒细胞凋亡的影响研究[D];广西大学;2006年
5 李然;Foxol对小鼠颗粒细胞凋亡的影响[D];南京农业大学;2010年
6 曹卉;铅镉对小鼠卵泡颗粒细胞凋亡及凋亡基因表达的影响[D];扬州大学;2011年
7 韩正滨;山羊卵泡颗粒细胞凋亡与卵母细胞发育能力的关系[D];山东农业大学;2005年
8 冯卫国;滴中孔培养法研究牛卵泡颗粒细胞凋亡与卵母细胞发育能力的关系[D];山东农业大学;2006年
9 周新华;镉对小鼠卵巢颗粒细胞凋亡作用及相关影响因素的研究[D];湖南农业大学;2006年
10 甘霏霏;脂肪代谢因子在PCOS中的表达及与颗粒细胞凋亡水平的相关研究[D];汕头大学;2010年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026