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淫羊藿叶多糖的提取纯化及其预防酒精性肝损伤的作用研究

潘佳  
【摘要】:淫羊藿(Epimedium koreanum Nakai),归为小檗科植物,又称仙灵脾,是一类药用历史久远的传统中药材。研究发现其药效丰富,有抗炎、抗衰老、降血脂等功效。近年来研究表明淫羊藿叶资源在保肝护肝方面药效显著。目前,对淫羊藿的研究大多集中在黄酮和生物碱方面,而对淫羊藿多糖生理活性的相关报道还很少见,其作用机制也尚不明确。因此,本研究对淫羊藿叶中多糖成分进行提取纯化,并对多糖的基本结构进行分析,同时对淫羊藿叶多糖的保肝护肝作用及其机制进行研究。主要研究结果如下:1.首先采用超声水提法提取淫羊藿叶多糖,并利用正交实验法优化多糖的提取条件;确定了最佳提取条件为料液比为1:25,提取温度70℃,提取时间50min。使用最佳提取条件所得到的淫羊藿多糖的得率为5.98%。利用DEAF-Sepharose fast flow阴离子交换柱和Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱对多糖进行分离纯化,得到均一多糖的组分,纯度为82.03%,利用高效凝胶渗透色谱法测定其分子量为31.2 k Da。通过红外光谱对淫羊藿多糖进行结构解析,结果表明淫羊藿多糖具有吡喃糖结构。利用酸法水解、衍生化分析以及高效液相色谱的手段对淫羊藿叶多糖水解的单糖组成进行分析,其成分组成为阿拉伯糖(2.25):半乳糖(1.12):葡萄糖(0.74):葡萄糖醛酸(1.00):鼠李糖(1.15):甘露糖(0.32)。2.建立小鼠酒精性肝损伤模型,探究淫羊藿叶多糖对预防酒精性肝损伤的作用机制。试验分为空白组、模型组(加入56%乙醇)、淫羊藿低、中、高剂量组(10、20、40 mg/kg)5组。结果表明:与模型组比较,淫羊藿多糖中、高剂量组均可降低血清中AST或ALT含量以及血液和肝脏中MDA含量、TG含量,同时提高模型组血液及肝脏中SOD、GPX活性以及GSH含量;当急性酒精摄入后,在10 h时淫羊藿多糖中、高剂量组均可提高模型组肝脏线粒体的SOD活性和GSH含量,同时降低MDA含量;15 h、20 h时淫羊藿多糖各剂量组能够提高模型组肝脏线粒体中GSH含量,同时降低MDA含量;病理学切片显示,淫羊藿中、高剂量组可改善坏死、变性的肝组织,其中高剂量组效果最好,表明淫羊藿多糖可以对肝组织起到保护作用。3.采用油酸(oleicacid,OA)和乙醇联合诱导Hep G2细胞,建立酒精性脂肪肝(AFLD)细胞模型,分为空白组、BSA组、模型组(加入1 mmol/L的OA和56%乙醇)和不同浓度淫羊藿多糖组(200、400、800μg/m L)6组,试验结果表明:与模型组相比较,淫羊藿多糖各剂量组分别能够抑制受损细胞内AST、ALT以及TG含量的升高;并有效降低细胞中MDA含量和提高SOD的活性;同时淫羊藿多糖400μg/m L剂量组能够显著提高ADH的活性,减少乙醇在肝细胞内的蓄积现象,具有良好的改善酒精性脂肪肝的功效。


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