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白花丹参中丹参酮成分的提取分离与含量测定

董蕊  
【摘要】:本文以开发利用丹参的新资源,探明丹参的一个种下变种——白花丹参(Salviamiltiorrhiza Bunge var.alba C.Y.wu et H.W.Li)的化学成分及进行含量测定为主要目的。对白花丹参中的丹参酮进行提取分离,初步摸索了采用新的提取分离方法,着重分离得到了三种纯度较高的单体化合物。利用高效液相色谱法对白花丹参与紫花丹参中的丹参酮ⅡA进行含量测定,证明白花丹参在一定程度上可以替代丹参的药用价值,为开发利用白花丹参这一新的药用植物提供科学依据。本研究首次将复日FR-980生物电泳图像分析系统应用到对白花丹参与紫花丹参中丹参酮ⅡA的含量测定中,为扩大中药化学成分含量测定方法开拓新的研究领域。 正品丹参来源于唇形科鼠尾草植物丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)的干燥根及根茎,主产于陕西随州(现湖北省境内),山东和河南等地。随着野生资源的减少,70年代中期,药材丹参已经供不应求,目前发现鼠尾草属Salvia共有40多个种(含变种、变型)的根及其根茎可作丹参使用。白花丹参为丹参的种下变种,白花丹参的花冠为白色或淡黄色,不同于正品丹参的紫色或紫红色花冠,为山东特产。据文献报道,白花丹参为优良品种,其有效成分二萜醌类成分高于正品丹参(紫花丹参),被誉为妇科良药,因具有降血脂、降血压、延年益寿之功效,长久以来,民间得此为宝,常以礼品相赠。白花丹参野生物种极为稀少,已濒临绝迹。为挽救和开发利用这一名贵药材,1987年,国务院发布的《中国珍稀濒危保护植物名录》中,将具有活血化瘀作用的丹参Salviamiltiorrhiza和白花丹参S.miltiorrhiza Bunge var.alba包括在内。 近年来,对正品丹参的化学成分及药理作用的研究报道较多,但对白花丹参(S.miltiorrhiza.Bunge var alba C.Y.Wu et H.W.Li)的化学成分和含量测定的报道较少且不深入。到目前为止从白花丹参中仅分离鉴定了14种脂溶性单体成分,而山东省有关部门自1990年以来,对白花丹参的野生驯化、种植栽培、生药质量标准、药理药效分析、毒理试验等方面进行了研究。药理、药效研究证明,白花丹参有较强的血管扩张作用,对高血脂症和动脉粥样硬化具有显著疗效,对血栓闭塞性脉管炎具有独特疗效,临床应用前景十分广阔。 吉林农业大学硕士学位论文 白花丹参中丹参酮成分的提取分离与含量测定 为了给系统研究白花丹参增添新的内容,进一步证实白花丹参的药用范围,为正确 评价白花丹参的质量提供理论依据,本文对白花丹参中的三个疗效显著的生物活性成分 采用了新的提取分离方法及含量测定的方法,进行了研究。 本研究以山东省莱阳市天意药材基地出产的白花丹参为原料,改变了文献中记载 的,以硅胶、氧化铝等柱层析,用苯、石油醚、丙酮、乙酸乙醋等极性小、毒性大、污 染性强的有机溶剂进行提取分离的方法,而使用新的方法,即使用Sephadex LH一20柱, 以乙醇、甲醇等为洗脱剂,进行提取分离。本文用此方法着重分离了三个二菇醒类单体 成分,操作方法如下:取丹参根Ikg,洗净晾干,粉碎成粗粉,过40目筛,用1 0L95 %乙醇浸提24小时,浸提3次,过滤后合并浸提液,减压浓缩成浓浸膏,用1的%甲醇 溶解,浓缩甲醇溶解液成浸膏,即得总丹参酮。将总丹参酮过sephadex LH一20柱,用 1 00%甲醇洗脱,分别得4个颜色组分段(黄色段、橙红色段、紫红色段、棕红色段), 各色段分别用高效硅胶板薄层层析,展开剂:苯一乙酸乙醋(19:1),层析后挥干,在 自然光下可清晰看见不同颜色斑点。根据薄层层析检测结果,按不同部分进行二次分离, 再上SephadexLH一20柱,分别用50%,70%甲醇洗脱,用自动部分收集器部分收集。 即可通过上述两次分离得到单体化合物。此方法操作简便,分离得率高,得到的3个单 体纯度均达到92%以上。该方法不仅对操作人员的毒害性小,对环境的污染性也很小, 而且成本低廉,易于操作,柱填料及洗脱剂均可反复回收利用,此方法可为工业化生产 提供参考依据。 实验分离得到的三个单体化合物,通过化学反应、理化常数测定及波谱解析(紫外 光谱、质谱和核磁共振),确定它们的化学结构均为二裕类化合物,分别为:丹参酮1 IA, 丹参酮I,甘西鼠尾新酮A。其中的甘西鼠尾新酮A是次甲基丹参醒的二聚体,在白花 丹参中首次发现。 本文利用高效液相色谱法,检测了产自于山东同地,同年种植,同年采收的白花丹 参与紫花丹参中丹参酮IIA的含量,结果表明:白花丹参中丹参酮IIA的含量高于紫花 丹参,在一定程度上说明白花丹参可以替代丹参在临床上使用。在丹参的不同部位上: 丹参侧根中丹参酮IIA含量最高,其次为丹参主根中丹参酮工IA含量,含量较低的为丹 参茎部的丹参酮IIA含量,从而更好地确定丹参的有效药用部位。 吉林农业大学硕士学位论文 白花丹参中丹参酮成分的提取分离与含量测定 本实验首次使用复日FR一980生物电泳图像分析系统对白花丹参与紫花丹参中丹参 酮I以的含量进行测定。根据该分析系统中数据处理器的像素定量分析原理,作者对白 花丹参与紫花丹参中不同部位的丹参酮工IA的含量进行测定。此分析系统普遍应用于电 泳的定量定性分析上,作者


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