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铜对猪肝细胞CuZn-SOD酶活性及mRNA表达的影响

梁海涛  
【摘要】:本试验以初生1日龄健康军牧1号仔猪为试验动物,研究不同铜浓度对CuZn-SOD酶活性及mRNA表达的影响。实验一利用24孔细胞培养板培养细胞,细胞培养液中添加10%小牛血清,同时分别添加0、15.6、31.2、46.8、62.4、78、93.6μmol/LCu,观察细胞形态,测定细胞培养液中CuZn-SOD酶活性。结果显示:各个试验组的酶活性均显著增加,62.4μmol/Lcu时酶的活性最高(P<0.05)。 实验二利用RT-PCR方法测定肝细胞CuZn-SODmRNA表达量。细胞培养液中添加10%小牛血清,同时分别添加0、31.2、62.4、93.6μmol/LCu,利用Trizol法从肝细胞中提取总RNA,采用RT-PCR方法扩增出SODcDNA,与pGEM-T载体相连接,转化大肠杆菌JM109,通过PCR鉴定及测序分析,证明所扩增DNA片段为目的片段。PCR产物经琼脂糖凝胶电泳,用β-actin作内参,用凝胶成像分析仪检测SODmRNA的相对表达量。结果显示,SODcDNA序列与基因库中的相一致,重合性达98.8%。细胞培养液中添加31.2、62.4、93.6μmol/LCu,肝细胞中SODmRNA的表达量均显著高于对照组(p<0.05),以62.4μmol/LCu组效果最为明显。 从两个实验的结果我们可以推测,铜作为CuZn-SOD的活性中心,不仅可以直接提高SOD的酶活性,而且可以对其基因表达进行调控,提高转录水平,使SODmRNA表达量增加,为后期的翻译提供了条件,这对机体的抗氧化功能有重要意义,为铜的抗氧化机制提供了分子依据。


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