收藏本站
《吉林农业大学》 2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

人参皂苷酶代谢产物化学修饰及其抗癌活性研究

弓晓杰  
【摘要】:人参(Panax ginseng C.A.Meyer)为五加科人参属多年生草本植物,是我国传统名贵中药,在中国、朝鲜、日本乃至亚洲国家被广泛用于滋补保健和医疗,对治疗心血管疾病、糖尿病、精神类疾病有较好的疗效。现代药理学研究发现,人参具有明显的抗癌效果,其主要的活性成分为人参皂苷,人参皂苷是由糖和苷元相构联而成的糖苷类化合物。人参皂苷口服后,在胃液、胆汁的作用下仅发生了轻微的氧化作用,不能被降解;只有在肠内菌的作用下,糖苷键才发生断裂,形成了一系列代谢产物。最新的药理学研究表明:被吸收入血并发挥抗癌活性的不是皂苷本身,而是其代谢产物M1。代谢物M1经血液进入肝脏后,发生酯化反应形成了脂肪酸酯类化合物EM1。由于EM1对细胞的毒性降低,在体内的保留时间延长,对宿主细胞的免疫调节能力增强,因此,EM1比M1有更强的抗癌活性。目前,国内外学者获取M1特别是EM1的途径,主要是通过肠内菌代谢及口服给药后从动物的血液、肝脏中分离获得,由于方法复杂,分离困难,得率极低,仅得到一系列M1脂肪酸单酯的混合物EM1,没能分离得到单体并确定具体结构。阻碍了这一理论的深入研究与发展。 本试验的研究,首先采用植物化学法分离获得分组皂苷及单体皂苷,其次借助酶工程技术,参照人参皂苷肠内菌代谢机理,在体外对人参皂苷酶代谢机理进行研究,探求二者代谢机理的相关性,代谢产物的一致性,尝试用酶代谢理论重新定义并解释肠内菌代谢,促进这一领域的研究向分子水平上发展。依据酶的特点,筛选出将原人参二醇型皂苷代谢成M1的专属性酶,进而大量富集代谢物M1,然后,采用组合化学法,模拟肠内菌代谢物M1在肝脏中的脂肪酸酯化,将酶代谢物产物M1在体外脂肪酸酯化,合成M1脂肪酸单酯的混合物EM1,分离得到单体,确定化学结构;进行药理学观察,评价其抗癌活性。 本试验采用有机溶剂提取、萃取、犬孔吸附树脂层析、硅胶柱层析等方法,从人参中分离得到了人参皂苷Re、Rb_1,对它们进行了物理、化学及波谱分析,确定了结构。在大孔树脂D101、NKA-12的比较研究中发现,NKA-12对人参皂苷有较好的吸附分离效果,经乙醇梯度洗脱可以直接分离得到人参皂苷Re。这一成果的完善,有利于Re的工业化生产。 在恒温水浴条件下,用酶NS37040对人参皂苷单体Rb_1、Re进行了酶解试验,酶解后的样品经酶灭活、离心、萃取、浓缩,再上硅胶柱层析分离纯化,得到了 吉林农业大学博士学位论文 摘要 人参皂普Rb,的三种主要酶解产物,利用物理、化学及波谱分析,对它们进行了分 析鉴定,确定它们分别是Ginsenoside一Rd、Metab。liteMI、20(S)一Pr。topanaxa- d 1 01。在酶解样品中,通过物理、化学、TLe、HPLC也发现了G insenos ide一FZ的 存在,由于G insenoside一FZ含量少,没有对其分离纯化。M。tabolit。Ml是人参中 不存在的成分,所以对它进行了详尽的波谱【质谱(MS)、红外(lR)、核磁(NMR、 多种ZDNMR)]分析,确定了其化学结构。依据上述的试验结果,明确了Rb,的代谢 途径为Ginsenoside一Rb,、Ginsenoside一Rd、Ginsenoside一F:*Metabolite一1--+ 20(S)一protopanaxadiol。对Re的酶解产物进行了分析,确定了其代谢途径为 G insenoside一Re*Ginsenoside一Rg,“Ginsenoside一Rh,一20(S)一ProtoPanaxatr一 1 01。上述结论与国内外学者用肠内菌对人参皂普Rb,、Re的代谢途径及产物基本 一致。酶是由细胞产生的具有催化能力的蛋白质,新陈代谢是生命活动的最重要 特征。一切生命活动都是由代谢的正常运转来维持的,而生物体代谢中的各种化 学反应都是在酶的作用下进行的;人体肠内菌多达100余种,且99%为厌氧菌,这 些厌氧菌分泌各种各样的酶,其活性也相当高。那么究竟是肠内菌还是其分泌的 酶参与了人参皂普的代谢?结合本试验结论及肠内菌、酶的特点,作者推断:肠 道内直接参与人参皂普代谢的是肠内菌分泌的酶,而非肠内菌。这一结论对于在 分子水平上研究人参皂普的代谢有一定的参考价值。 采用Ag 1 lentll00高效液相色谱仪对酶解总皂普样品中M1、Rg。含量进行了测 定,确定Ml最佳酶的转化率为8.36%; Rg3最佳酶的转化率为2.58%。 采用正交试验设计系统研究了不同酶、温度、时间对MetaboliteMI、 Ginsenoside一Rg3转化率的影响,结果发现酶、温度、时间对Metabolite Ml的转 化率有极显著的影响。并且,最佳的酶为NS 44018,最佳时间为20天,最佳温度 为50oC。Metabolite Ml的转化率可达8.36%。酶、时间对Ginsenoside一Rg3的转 化率也有显著的影响,而温度对G ins。n。5 ide一Rg。的转化率无显著影响,最佳酶为 NS 44066,最佳时间为1天。酶作为生物大分子其作用的最佳的温度、时间各不 相同,并且对底物化学结构、作用位置都有极强的选择性。通过对不同人参皂普 专属酶的筛选可以定向酶解,大量获得目标化合物。本试验已初步筛选出对M1、 Rg。作用专属性较强的酶及反应条件,这一成果完善将为创新药物的研发、工业化 生产莫定理论基础。 采用5 ohotten一Baumann方法,将获得的代谢物M1与脂肪酸进行化学合成,将 合成产物萃取、离心、浓缩,经硅胶柱层
【学位授予单位】:

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 吕燕宁;抗人参皂苷Rf单克隆抗体的制备及其酶免疫分析[J];国外医学.中医中药分册;2001年03期
2 辛颖,倪劲松,王心蕊,石博,王越晖,吴家祥;20(S)-人参皂苷Rg3抗B16黑色素瘤转移的作用[J];吉林大学学报(医学版);2004年04期
3 张晶;王秀全;王德清;侯金刚;;超微粉碎对人参中皂苷测定量的影响[J];食品科学;2009年18期
4 高峰;人参与人参皂苷Rh_2——恶性肿瘤治疗的新视点[J];人参研究;2001年04期
5 钟华,张杰,张进;薄层扫描法测定乳结散胶囊中人参皂苷Rb_1、Rg_1含量[J];湖南中医学院学报;2002年03期
6 高敏;人参注射剂质量标准研究[J];云南中医中药杂志;2003年05期
7 王亮;顾宜;费燕;;人参皂苷Rg_1脂质体制备工艺的优化[J];中国中药杂志;2006年23期
8 王悦虹;娄大伟;于晓洋;任红;金丽;;人参的药理学作用研究进展[J];吉林化工学院学报;2010年02期
9 孙永慧,李文春,刘相辉;人参标准提取物制备工艺初探[J];基层中药杂志;2001年03期
10 马娜,宋宏新;人参糖苷酶提取纯化及性质研究[J];陕西中医;2003年12期
11 杨伟峰,赵维良;胶束电动毛细管色谱法测定西洋参中人参皂苷Rb_1,Re的含量[J];中国中药杂志;2003年12期
12 丛登立,王广树,张东言;人参果皂苷口服液中人参皂苷含量的测定[J];人参研究;2003年04期
13 许小琴,金文杰,李金贵,秦爱建,钱琨;转化型人参皂苷对单克隆抗体生成的影响[J];扬州大学学报(农业与生命科学版);2005年01期
14 马海琴,王志清,杨微;人参和西洋参的鉴别方法概述[J];特产研究;2005年03期
15 赵杨;陈世忠;;生脉饮化学成分研究[J];中草药;2006年06期
16 覃洁萍;张广征;张赟赟;卫锡锦;张炜;刘雯;;三七不同炮制品中皂苷类成分的测定[J];中草药;2006年08期
17 王帅玉;付本懂;王鲁;郭志廷;韦旭斌;;人参皂苷Rh_2对肿瘤细胞的诱导分化作用研究进展[J];中兽医医药杂志;2008年01期
18 梁生旺,王淑美,李永军,罗杰鹏;消糖宁胶囊中人参皂苷Rg_1的含量测定[J];药物分析杂志;1998年S1期
19 刘桂艳,刘墨祥,于连贵,洪波;西洋参果浆发酵液人参皂苷含量的分析[J];吉林农业大学学报;2001年03期
20 陈英杰,窦德强,裴玉萍,孙朋悦;人参及其制品的质量控制[J];人参研究;2001年S1期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李文兰;南莉莉;季宇彬;孙向明;孙志;;人参中人参皂苷Rg_1、Rb_1大鼠在体肠吸收机制的研究[A];中药饮片质量分析与中药鉴别技术交流研讨会论文集[C];2009年
2 楚世峰;张均田;;人参皂苷Rg1的多靶点作用和机制分析[A];全国第一次麻醉药理学术会议暨中国药理学会麻醉药理专业委员会筹备会论文汇编[C];2010年
3 丛中一;林双甡;丛登立;宿晓云;王毅;周余来;;人参皂苷Rh3对人结肠癌细胞增殖与凋亡的影响[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
4 杨丽;;高效液相色谱法测定冠心丹参胶囊三七的含量[A];2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C];2008年
5 胡向阳;方建颖;蔡伟明;汤章城;;模拟失重对钙调蛋白基因表达与人参皂苷合成的影响[A];中国空间科学学会空间生命专业委员会2003年中国空间生命科学与航天医学会议论文摘要集[C];2003年
6 杨威;李胜文;李凡;张凤春;;人参皂苷Rg3抗鼠源性膀胱癌的侵袭和转移[A];2000全国肿瘤学术大会论文集[C];2000年
7 朱伟;易琼;王鲁;付本懂;贺常亮;吕爽;毕文岩;;人参皂苷Rh2的药理学研究进展[A];中国畜牧兽医学会2010年学术年会——第二届中国兽医临床大会论文集(下册)[C];2010年
8 程婕;房中则;刘勇;杨凌;;人参皂苷对人细胞色素P450氧化还原酶的影响[A];第八次全国药物与化学异物代谢学术会议论文摘要[C];2006年
9 卜海博;王丹;李瑞龙;王瑾;李向日;;生晒参中多糖和人参皂苷含量的相关性研究[A];中华中医药学会中药炮制分会2011年学术年会论文集[C];2011年
10 牛泱平;金棉梅;高瑞兰;陈小红;;人参皂苷组分PND、GPT对人骨髓祖细胞增殖作用研究[A];第六届全国中西医结合血液病学术会议论文汇编[C];2002年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王雪飞;人参皂苷实现工业化生产[N];健康报;2004年
2 李 春;人参皂苷对癌症的预防作用[N];中国中医药报;2003年
3 常怡勇;国外人参研究最新进展[N];中国医药报;2004年
4 常章富;论中药的有毒与无毒(下)[N];中国医药报;2009年
5 陆 静;2003年度国家科技奖中医药成果扫描[N];中国中医药报;2004年
6 华锋;亚泰集团医药业成利润新增点[N];中国医药报;2009年
7 本报记者 倪迅;为癌症患者奉献智慧和爱心[N];光明日报;2003年
8 ;国家科技奖西医药成果点击[N];中国医药报;2004年
9 陈玉婷;中药鉴定[N];中国中医药报;2003年
10 刘 斌;皂苷--中药化学(二十)[N];中国中医药报;2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李英博;人参皂苷诱导人神经干细胞增殖、分化的机制研究以及在缺血缺氧和蛛网膜下腔出血诱导的脑损伤中的应用[D];重庆医科大学;2010年
2 张维;人参皂苷对复苏大鼠线粒体功能的作用及实验模型的选择[D];中国人民解放军军医进修学院;2010年
3 张春枝;人参皂苷糖基水解酶的研究[D];大连理工大学;2002年
4 周英武;人参皂苷Rg1对树突状细胞效应与分子机制的研究[D];北京中医药大学;2011年
5 吴佳莹;人参皂苷Rg1选择性激动甾体激素受体抗Aβ_(25-35)致原代皮层神经元损伤与保胚胎干细胞衍生神经元研究[D];浙江大学;2012年
6 高娟;糖苷酶转化人参皂苷的研究[D];东北师范大学;2012年
7 曲相如;拟人参皂苷Rh2诱导人胃癌细胞SGC凋亡作用及其研究机制[D];吉林大学;2012年
8 蔡宝祥;人参皂苷Rb1、CK对紫外线损伤的保护作用及其机制研究[D];南京医科大学;2009年
9 吕爽;人参皂苷Rh2衍生物体外促进IFN-γ分泌及CTLL-2细胞增殖的作用研究[D];吉林大学;2014年
10 刘启兵;活性氮介导的内皮细胞株损伤及人参皂苷Rg1对Aβ肽源性活性氮损伤保护机制研究[D];浙江大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘敏;纤维素、淀粉、氨基酸对人参皂苷转化的影响[D];中国农业科学院;2013年
2 李鹏;人参皂苷与药物依赖的相关性研究[D];北京中医药大学;2014年
3 赛佳洋;人参皂苷Re单克隆抗体的制备及其酶联免疫分析方法的建立[D];北京中医药大学;2014年
4 刘欣;人参皂苷Rb_1水解酶的分离纯化及其性质的研究[D];大连医科大学;2003年
5 田旭;奥克梯隆型人参皂苷及其相关物质的研究[D];吉林大学;2012年
6 李萍;复方人参皂苷氨基酸的研究[D];吉林农业大学;2013年
7 张道军;高活性人参皂苷催化酶的筛选[D];杭州师范大学;2013年
8 刘荣华;人参皂苷注射液在大鼠蛛网膜下腔出血后脑血管痉挛的实验研究[D];中南大学;2010年
9 曹姗姗;人参皂苷Re对心肌缺血大鼠的保护作用及其机制的研究[D];吉林大学;2010年
10 李学;内生细菌转化人参皂苷的研究[D];吉林农业大学;2013年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978