粗糙脉孢菌物理—化学诱变及分子验证
【摘要】：粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)是子囊菌门(Ascomycoya),子囊菌纲(Ascomycetes),球壳亚纲(Sordariomycetidae),粪壳目(Sordariales),粪壳科(Sordariaceae),脉孢菌属(Neurospora)的真菌。在本试验中采用了紫外线,微波,甲基磺酸乙酯(EMS),平阳霉素(PYM)等四种不同的诱变剂对粗糙脉孢菌分别进行了诱变处理,对于获得的诱变菌株进行了分离,筛选,保存,并且依照以下的标准在形态结构上与原始菌种进行了比较:
1 菌丝体细胞壁上有无条纹及条纹的形状。
2 分生孢子的形状。
3 分生孢子细胞壁上有无条纹及条纹的形状。
4 菌丝体以及分生孢子的颜色变化。
结果表明:
1 大多数的诱变菌株在形态上发生了较大的变化,可以从形态结构上与原始菌种进行区别。而有少部分的诱变菌株则在形态上没有发生较大的变化,不能从形态上与原始菌种进行区分。对于这部分不能从形态上与原始菌株区分的诱变菌株则采用了分子生物学的方法(主要是RAPD)对其进行了分析。
2 紫外诱变最适的处理条件为:C(1×10~4/ml)浓度照射10min,D(1×10~3/ml)浓度照射5min。在本文中对紫外在形态上的影响进行了初步的研究。发现,用紫外诱变,也可以获得形态上与原始菌株直接区分突变的突变菌株,而对于部分不能从形态上直接区分的菌株则可以采用分子的手段进行区分。
3 在用微波进行诱变处理的时候,在短时间以及长时间进行照射的时候(10s-40s、120s)可以取得比较好的效果,所得到的突变菌株采用显微镜观测即可进行区分,但是在中等时间照射的条件下,效果并不是很明显,所得到的突变菌株不能通过显微镜观测进行区分,需要采用分子的手段进行区分。从照射方法上看,直接照射易于使菌丝体发生变化,累计照射更易于使分生孢子发生变化。从
【关键词】：粗糙脉孢菌 物理诱变 RAPD 化学诱变 【学位授予单位】：吉林农业大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：Q937
【目录】：
- 中文摘要7-9
- 英文摘要9-11
- 前言11-17
- 1 研究概况11-16
- 1．1 微生物作为遗传学研究材料的优越性11-12
- 1．2 粗糙脉孢菌的研究概况12-16
- 2 试验目的和意义16-17
- 第一章 粗糙脉孢菌的物理诱变17-30
- 一 粗糙脉孢菌的紫外诱变17-22
- 1 材料与方法17-19
- 1．1 试验材料17
- 1．2 试验方法17-19
- 2 试验结果19-22
- 二 粗糙脉孢菌的微波诱变22-30
- 1 材料与方法23-24
- 1．1 试验材料23
- 1．2 试验方法23-24
- 2 试验结果24-30
- 第二章 粗糙脉孢菌的化学诱变30-50
- 一 粗糙脉孢菌的EMS诱变30-42
- 1 材料与方法30-31
- 1．1 试验材料30
- 1．2 试验方法30-31
- 2 试验结果31-42
- 二 粗糙脉孢菌的平阳霉素诱变42-50
- 1 材料与方法42-44
- 1．1 试验材料42-43
- 1．2 试验方法43-44
- 2 试验结果44-50
- 第三章 诱变菌株的形态观察50-65
- 1 材料与方法50-51
- 1．1 试验材料50
- 1．2 试验方法50-51
- 2 试验结果51-65
- 2．1 粗糙脉孢菌紫外诱变菌株51-54
- 2．2 粗糙脉孢菌微波诱变菌株54-57
- 2．3 粗糙脉孢菌EMS诱变菌株57-61
- 2．4 粗糙脉孢菌平阳霉素诱变菌株61-65
- 第四章 粗糙脉孢菌的RAPD分析65-77
- 1 材料与方法65-71
- 1．1 试验材料65
- 1．2 试验方法65-71
- 2 结果分析71-77
- 2．1 RAPD条件的选择71-72
- 2．2 数据处理72-77
- 第五章 结论与讨论77-83
- 1 试验材料77
- 2 试验方法77-83
- 2．1 紫外诱变77-78
- 2．2 微波诱变78-79
- 2．3 EMS诱变79
- 2．4 平阳霉素诱变79
- 2．5 RAPD分析79-80
- 2．6 几种方法的比较80-83
- 参考文献83-87
- 附录87-88
- 致谢88
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