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《吉林农业大学》 2006年
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人参CLASSⅢ几丁质酶基因克隆、序列分析及原核表达

孙炳欣  
【摘要】:几丁质(β-1.4-乙酰葡萄糖胺线形同聚物)是病原真菌细胞壁的主要成分,几丁质酶通过破坏病原真菌菌丝尖端新合成的几丁质,使病原真菌细胞壁中的几丁质降解;破坏细胞新物质的沉积,致使病原体死亡,且所产生的细胞壁碎片具有诱导物作用,可激发寄主植物的抗病反应。植物几丁质酶具有广泛的生理活性,尤其在植物抗病性方面具有重要作用,植物几丁质酶基因工程成为目前抗真菌基因工程研究热点之一。 本文以人参为材料,首次从中克隆了ClassⅢ几丁质酶基因,并进行了序列分析,研究了该基因在大肠杆菌中的表达情况,其主要结果如下: 1.通过RT-PCR与反向PCR方法,从人参中克隆到一个ClassⅢ几丁质酶基因,并进行测序,全长为1432bp,其中包含完整的开放阅读框即从第272位的起始密码子到第1169位的终止密码子,推测编码蛋白的氨基酸序列含298个氨基酸残基,无内含子,并在GenBank上注册(DQ532359); 2.人参ClassⅢ几丁质酶基因与其它植物ClassⅢ几丁质酶基因在核苷酸和氨基酸水平上有很高同源性;通过对人参ClassⅢ几丁质酶基因的系统发育树分析得出,人参ClassⅢ几丁质酶和其它植物的ClassⅢ几丁质酶具有共同的起源;Class Ⅰ、Class Ⅱ和ClassⅣ几丁质酶来源于同一祖先,而ClassⅢ与ClassⅤ几丁质酶来源于同一祖先。 3.人参ClassⅢ几丁质酶基因编码一酸性几丁质酶,等电点pI为4.55,预测分子量为31.4KD;人参ClassⅢ几丁质酶氨基酸序列含有两个功能区域即N-端信号肽区和糖基水解酶18家族催化区;人参ClassⅢ几丁质酶蛋白的催化区内,144-152为几丁质酶18家族的活性位点,序列为LDGVDFDIE,活性中心为E(Glu);人参ClassⅢ几丁质酶蛋白的成熟位点在第25—26的Ala—Gly之间; 4.用同源建模法模拟出人参ClassⅢ几丁质酶的空间结构模型; 5.将人参ClassⅢ几丁质酶基因亚克隆到大肠杆菌的表达载体PET-28a(+)中,并转入大肠杆菌BL21中,SDS-PAGE分析初步表明几丁质酶以包涵体的形式表达。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S567.51

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【引证文献】
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1 谢东丽;龙眼(Dimocarpus longan Lour.)花芽几丁质酶基因克隆与植物表达载体构建[D];福建农林大学;2010年
【参考文献】
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【共引文献】
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5 刘菊华;徐碧玉;张建斌;金志强;;香蕉一个内切几丁质酶基因的表达及其与乙烯和果实成熟的相互关系[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
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7 张志云;张虎生;孙毅;梁爱华;;双价抗虫基因植物表达载体的构建[A];2004年北方七省市植物学年会论文集[C];2004年
8 张雨丽;张桂征;韦博尤;闭立辉;顾家栋;;转基因育种技术及其在家蚕育种中的展望[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(3)[C];2009年
9 张文娟;李聪;王步云;;几丁质酶与苜蓿抗病性研究[A];中国草学会牧草育种委员会第七届代表大会论文集[C];2009年
10 刘菊华;金志强;徐碧玉;;植物功能基因组学研究技术及其在热带作物上的应用前景[A];中国热带作物学会第七次全国会员代表大会暨学术讨论会论文集[C];2004年
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2 张婕;嗜热真菌热稳定几丁质酶基因的克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年
3 许光辉;基于基因芯片技术的刺五加改善果蝇睡眠作用的机制研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
4 张妙霞;野生香蕉(Musa spp., AB group)抗寒相关基因的克隆与表达分析[D];福建农林大学;2010年
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6 周小玲;4个四川桤木品系苗木的生理生态机理研究[D];中南林业科技大学;2007年
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8 任红敏;大黄酚对黄瓜白粉病菌的抑制作用机制研究[D];河北农业大学;2011年
9 咸洪泉;菌寄生真菌几丁质酶基因的克隆及功能研究[D];山东农业大学;2011年
10 姜芳;马铃薯Y病毒CP基因不同区段对发夹RNA和人工的miRNA介导的病毒抗性的影响[D];山东农业大学;2011年
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1 卢小三;两个杨树无性系再生体系的建立及抗虫基因Cry1C+9C转化的初步研究[D];华中农业大学;2010年
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4 陈湘瑜;花生组织特异表达抗黄曲霉相关基因的载体构建[D];福建农林大学;2010年
5 靳晓芸;壳寡糖对甘蔗抗性生理生化的影响[D];广西民族大学;2010年
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7 李文娴;PGIP的基因克隆及抗真菌活性研究[D];昆明理工大学;2010年
8 焦天雷;烟草(Nicotiana tabacum L.)赤星病抗性QTL的定位分析[D];浙江大学;2011年
9 杨晓凤;大豆农杆菌介导转化体系的优化及Sporamin和Chitinase KDEL 基因转化研究[D];浙江大学;2011年
10 郭培鑫;转基因杨树抗虫性及对节肢动物群落影响的初步研究[D];河北农业大学;2011年
【同被引文献】
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1 游向荣;龙眼成花转变与成花逆转的差异蛋白质组学研究[D];福建农林大学;2009年
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1 王宏国;龙眼花性分化的细胞学机制研究[D];福建农林大学;2008年
【二级参考文献】
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10 张成岗,张利达,欧阳曙光,张启发,贺福初;序列同源性分析软件Blast的WEB界面构建及其应用[J];生物化学与生物物理进展;2001年06期
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1 刘亮伟;木聚糖酶蛋白质序列分析、分子进化和分子模拟[D];江南大学;2005年
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10 徐克章;人参、西洋参叶片光合作用特性的研究[D];南京农业大学;2003年
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1 孙炳欣;人参CLASSⅢ几丁质酶基因克隆、序列分析及原核表达[D];吉林农业大学;2006年
2 谢树章;蜡梅(Chimonanthus praecox (L.)Link)几丁质酶基因Cpchia的克隆及原核表达产物特性分析[D];西南大学;2009年
3 张厚君;人参、西洋参网络数据库系统的研究[D];吉林大学;2006年
4 李波;人参陈皮及其配伍抗疲劳实验研究[D];辽宁中医学院;2001年
5 李超;人参配伍当归对小鼠化学性骨髓抑制、免疫抑制防治作用及其最佳配伍比例初筛的研究[D];辽宁中医学院;2004年
6 李德全;十九畏的本草文献考证和人参五灵脂配伍的实验研究[D];北京中医药大学;2005年
7 霍丙全;基于计算机视觉技术的人参等级评定的研究[D];吉林大学;2005年
8 孙燕琳;沙棘几丁质酶基因的克隆和序列分析[D];中国科学院研究生院(大连化学物理研究所);2007年
9 Lo Aissata Mamadou;胶陀螺和人参多糖在小鼠体内的抗疟活性[D];东北师范大学;2007年
10 闫喜焕;人参在方剂配伍中性能改变的历史文献考察[D];黑龙江中医药大学;2007年
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