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《吉林农业大学》 2005年
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小麦矮腥黑粉菌冬孢子萌发条件及核糖体DNA多态性分析

弭娜  
【摘要】: 小麦矮腥黑穗病(Dwarf bunt of wheat)是由小麦矮腥黑粉菌(Tilletia controversa kuhn,简称TCK)引起的一种系统侵染性病害,是世界小麦生产上最具有破坏性的小麦病害之一,同时也是重要的国际检疫性病害。自20世纪70年代以来,该病害一直是中美小麦贸易中的焦点问题,所以引起了我国政府部门及科研部门的高度重视。然而在生物学性状上,小麦矮腥黑粉菌的形态与小麦网腥黑粉菌、小麦光腥黑粉菌等多种腥黑粉菌极为相似,尤其是与小麦网腥黑粉菌的冬孢子形态特征明显交叉重叠,难以区分,传统的病害诊断、检测方法主要依据病原形态学、生理学和病害症状学等特性,不但过程繁琐、时间周期长,而且准确性差、精度不高。因此,研究开发快速、准确的病害分子诊断、检测技术,对于防止该病害的传入、扩散和蔓延,确保我国小麦安全生产具有重要的理论意义和应用价值。 本研究对小麦矮腥黑粉菌冬孢子萌发条件进行了初步研究。采用水琼脂培养基、土壤浸提液培养基、T19固体培养基培养小麦矮腥黑粉菌冬孢子,结果表明该病菌冬孢子在三种培养基上均能萌发,以土壤浸提液培养基为最适萌发培养基,冬孢子萌发的最适菌悬液浓度约为50万个/mL,一般20天后冬孢子开始萌发,35-50天时萌发达到高峰期。小麦矮腥黑粉菌菌悬液(浓度为50万/mL)经不同时间、不同浓度NaC10处理,可以得到不同结果,本试验发现0.3MNaC10处理30min的菌悬液,其萌发率最高。研究中还对小麦矮腥黑粉菌菌丝体进行了培养,试验表明:通常冬孢子在萌发35-40天时,将萌发的冬孢子可转置液体培养基中培养。PDA培养基和T19液体培养基均可培养菌丝体,PDA培养基的菌丝体产量较高,15天时菌丝体干重可达80mg/个孢子,T19虽然产量低于PDA培养基,但不易污染,适合菌丝体大量培养。该菌对多种碳、氮源及维生素的利用能力相差较大,一定浓度的生物素促进孢子萌发,烟酸、对氨基苯甲酸和泛酸钙抑制孢子萌发,该病菌对腺嘌呤、尿嘧啶、胞嘧啶的利用能力较低。 本研究从国内外收集了小麦矮腥黑穗病菌10个地理种群以及小麦光腥黑粉菌、小麦网腥黑粉菌、小麦散黑穗病菌和玉米丝黑穗病菌等部分近缘种的冬孢子标样。建立了改进的氯化苄DNA提取法,采用液氮冷冻研磨病菌冬孢子,可从病菌10mg冬孢子中成功提取基因组DNA,DNA的质量和数量基本能满足RAPD、RFLP、AFLP等分子生物学研究。采用真菌通用引物ITS1(TCCGTAGGTGAACCTGCGG)和ITS4(TCCTCCGCTTATTGATATGC),对小麦矮腥黑粉菌和其它近似种rDNA的ITS区进行PCR扩增,结果表明:小麦矮腥黑粉菌和其它近似种均能扩增到一条大小在500~750bp的条带,说明该对引物不能将小麦矮腥黑粉菌同其它近似种区分开。利用EcoRⅠ、PstⅠ和MseⅠ三种限制性内切酶对小麦矮腥黑粉菌及其近缘种的rDNA-ITS区进行酶切,通过RFLP分析,结果表明在供试的10个小麦矮腥黑粉菌地理种群的rDNA-ITS区均能够找到长约250bp的特异片段,而在其它近缘种中未扩增出。将得到的DNA特异性片段进行回收、克隆、序列测定,进一步的工作是根据测序结果设计特定引物对小麦矮腥黑粉菌及其他近似种菌系进行筛选,将获得的稳定、扩增效果好的引物确定成SCAR标记。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2005
【分类号】:S435.121

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张江洪,张清源,方元炜,江文清;荧光显微术在TCK、TCT鉴别中的应用[J];福建农业科技;2001年04期
2 熊庆,刘作易;几种分子生物学方法在真菌中的应用[J];贵州农业科学;2002年03期
3 阎培生,罗信昌,周启;木耳属真菌rDNA特异性扩增片段的RFLP研究[J];菌物系统;1999年02期
4 王源超,张正光,郑小波;核糖体基因ITS作为苎麻疫霉、恶疫霉分类辅助性状的研究[J];菌物系统;2000年04期
5 王洪凯,张天宇,张猛;应用5.8S rDNA及ITS区序列分析链格孢种级分类[J];菌物系统;2001年02期
6 陈永青,姜子德,戚佩坤;RAPD分析与ITS序列分析在拟茎点霉分类鉴定上的应用[J];菌物系统;2002年01期
7 易建平,陶庭典,印丽萍,沈禹飞,潘良文,郑建中;小麦印度腥黑穗病菌和黑麦草腥黑穗病菌的单孢检测[J];南京农业大学学报;2003年02期
8 易建平,沈禹飞,陶庭典,戚龙君,印丽萍,郑建中;PCR技术在印度腥黑穗病菌检测和鉴定中的应用[J];上海农业学报;2002年02期
9 余仲东,张星耀,曹支敏;真菌核糖体基因间隔区研究概况[J];西北林学院学报;2000年02期
10 薛光华,范伟功,张祥林;新疆截获进境植物疫情分析及检疫监管措施[J];新疆农业科学;2004年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢永芳,舒坤贤,梁亦龙,袁帅,张继承;小鼠胚胎发育中期肠细胞增殖与凋亡的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
2 王子良,许丽艳,李恩民;质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
3 康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
4 安刚;黄天华;谢庆东;王德刚;;pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响[J];癌变.畸变.突变;2007年04期
5 朱斌;杨罗艳;赵晓昆;;膀胱癌多药耐药基因MDR-1与金属硫蛋白-3表达的关系[J];癌变.畸变.突变;2007年05期
6 毕玉平,廖俊杰,单雷,王兴军,徐平丽;番茄双抗TMV和CMV基因工程的研究[J];山东农业科学;1997年06期
7 单雷,毕玉平,王兴军,徐平丽,李广存;双抗TMV和CMV转基因番茄后代的遗传分析[J];山东农业科学;1998年04期
8 葛宏华,孙莉宁,张其瑞;家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期
9 王北艳;曹宁;汤晖;;苜蓿中华根瘤菌电转条件的优化[J];安徽农学通报;2008年11期
10 刘可杰,吕淑霞,沈世华;FaDREB1基因RNAi的植物表达载体的构建[J];安徽农业科学;2005年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王春花;成军;郎振为;吴煜;杨艳杰;张黎颖;刘妍;;基因表达谱芯片技术筛选XTP3蛋白反式调节基因[A];第一届全国人工肝及血液净化学术年会暨全国人工肝及血液净化攻关协作组成立大会论文集[C];2004年
2 唐南洪;王晓茜;李秀金;陈燕凌;;构建特异高表达人谷氨酰胺合成酶基因(hGS)的肝细胞[A];第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会论文集(上册)[C];2007年
3 樊继德;孔庆国;张梅;于喜艳;;子房注射法获得转基因甜瓜植株[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
4 李姝诺;李亚东;王琦;;利用ITS区rDNA分析越橘内生真菌的种级分类[A];第二届全国果树分子生物学学术研讨会论文集[C];2009年
5 余霞;杨丹玲;陈进会;龚国淑;;真菌的分类现状及鉴定方法[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
6 商庆龙;谷鸿喜;;HPV16 L1蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性研究[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
7 陈振文;赵太云;孙贺娟;路静;王迎;孟霞;曹争和;王钜;;微卫星DNA与生化标记分析对长爪沙鼠群体遗传分析的比较[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
8 王革;王妍;何凌冰;乔刚;朱一松;王君艳;;酵母分泌表达重组人神经生长因子[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
9 任华;顾建华;孙竹筠;沈万赟;吴鹰;周忠良;;RT-PCR法检测斑马鱼(Danio rerio)卵黄蛋白原mRNA表达[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
10 马珺;陈云霜;王爱善;李仲逵;;珍稀鸟类东方鹳的性别鉴定[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
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1 黄曼;电子束辐照在线杀虫/菌效果及对小麦品质影响的研究[D];华南理工大学;2010年
2 廖芳;重要植物疫害的检测鉴定及分子系统学研究[D];南开大学;2010年
3 耿月华;中国土壤暗色丝孢菌五个疑难属的形态学和分子系统学分析[D];山东农业大学;2011年
4 杜萍;中国野生毛木耳遗传多样性研究[D];北京林业大学;2011年
5 张爱华;赭曲霉毒素A免疫检测方法的研究与呕吐毒素生物转化菌NJA-1的鉴定[D];南京农业大学;2010年
6 魏朝明;中国螽(虫斯)总科昆虫的RAPD分析研究[D];陕西师范大学;2000年
7 贾永清;表达禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2000年
8 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
9 崔俊;c-fms癌基因异常激活机制及携带AFP增强子反义c-fms与肝癌的研究[D];第一军医大学;2000年
10 陈烨;幽门螺杆菌粘附素HpaA的克隆、表达及其免疫原性和保护性研究[D];第一军医大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 吴良庆;砀山梨炭疽病菌鉴定及有效药剂筛选[D];安徽农业大学;2010年
2 张立付;安徽省大豆疫病菌的分离、鉴定及致病型研究[D];安徽农业大学;2010年
3 刘芳;栲属植物生斑痣盘菌目的分类和皮下盘菌种内遗传多样性的ITS序列分析[D];安徽农业大学;2010年
4 王承芳;安徽和山东耳霉物种多样性与分子系统学研究[D];安徽农业大学;2010年
5 刘洪霞;粪鬼伞菌丝体多糖的分离纯化、结构分析和对S-180肿瘤的抑制作用研究[D];长春工业大学;2010年
6 邱罗;广州薇甘菊空间分布预测研究[D];中南林业科技大学;2010年
7 郝芳;油茶根腐病原菌及其PCR快速检测技术研究[D];中南林业科技大学;2009年
8 曲文文;山东省核桃(Juglans regia)主要病害病原鉴定[D];山东农业大学;2011年
9 戴杨;球毛壳ND35菌株在植物上的侵染、定殖检测和对植物生长的影响[D];山东农业大学;2011年
10 李明勇;兔皮肤病原真菌的分离鉴定及常用消毒剂的筛选[D];山东农业大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李明,王小明;分子系统学及其应用[J];大自然探索;1997年01期
2 李英波,罗信昌,李滨,郭良栋,文华安;香菇菌株的限制性片段长度多型性[J];真菌学报;1995年03期
3 李泰辉,宋斌,陈月琴,屈良鹄,陆勇军;鸡油菌的25S rDNA部分序列及其系统学意义(英文)[J];菌物系统;1999年01期
4 贾建航,李传友,金德敏,李莉云,王斌,翁曼丽;香菇空间诱变突变体的分子生物学鉴定研究[J];菌物系统;1999年01期
5 阎培生,罗信昌,周启;木耳属真菌rDNA特异性扩增片段的RFLP研究[J];菌物系统;1999年02期
6 黄河,毛伟敏,郑儒永;小克银汉霉核糖体DNA PCR扩增产物的限制性片段长度多型性(英文)[J];菌物系统;1999年03期
7 高智谋,郑小波,陆家云;苎麻疫霉雄器侧生性状的遗传研究[J];菌物系统;1999年03期
8 李增智,黄勃,樊美珍,唐晓庆;利用RAPD-PCR检测三种白僵菌及球孢白僵菌种内变异[J];菌物系统;1998年02期
9 曾士迈;关于Schrdter的真菌生长温度当量公式的一点改正[J];科学通报;1980年23期
10 张星耀,赵仕光,朴春根,吕全,贾秀贞;树木溃疡病病原真菌类群分子遗传多样性研究Ⅰ.——小穴壳菌属、疡壳孢属、壳囊孢属、盾壳霉属分类地位的分子证明[J];林业科学;1999年03期
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中国期刊全文数据库 前10条
1 林萍,陈国弥;黄埔局从进境船舶食品仓小麦中检出小麦矮腥黑粉菌[J];植物检疫;2004年03期
2 周卫川;小麦矮腥黑粉菌和禾草腥黑粉菌的快速鉴别研究[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2005年S1期
3 孙振宇;马占鸿;王海光;刘亮;冯剑;张贵新;;等离子体对小麦矮腥黑粉菌处理效果的扫描电镜观察[J];植物病理学报;2008年02期
4 林授锴;王念武;翁瑞泉;周卫川;郭琼霞;;小麦矮腥黑粉菌检疫鉴定研究进展和展望[J];武夷科学;2007年00期
5 董微;陈万权;刘太国;;小麦矮腥黑粉菌的鉴定及检测方法[J];植物保护;2007年06期
6 梁再群;郭翼奋;朱宝琨;卢公器;;环氧乙烷熏蒸小麦矮腥黑粉菌应用技术的研究[J];植物保护学报;1989年04期
7 林授锴;王念武;翁瑞泉;周卫川;郭琼霞;;小麦矮腥黑粉菌检疫鉴定研究进展和展望[J];植物检疫;2008年05期
8 姚卓;陈万权;高利;刘太国;刘博;;小麦矮腥黑粉菌冬孢子萌发和室内人工接种方法的探索[J];植物保护;2014年03期
9 高飞;高利;刘太国;高继国;陈万权;;小麦矮腥黑粉菌及其近缘种的RPB2基因片段序列分析[J];植物保护;2010年01期
10 王念武;周卫川;郭琼霞;;小麦矮腥黑粉菌PCR快速检疫鉴定方法[J];武夷科学;2008年00期
中国重要会议论文全文数据库 前4条
1 周卫川;;小麦矮腥黑粉菌和禾草腥黑粉菌的快速鉴别研究[A];中国植物病理学第七届青年学术讨论会论文集[C];2005年
2 孙振宇;王海光;马占鸿;刘亮;冯剑;张贵新;;利用等离子体对小麦矮腥黑粉菌的杀菌研究[A];第三届全国生物入侵大会论文摘要集——“全球变化与生物入侵”[C];2010年
3 兴振宇;刘太国;高利;刘博;陈万权;;小麦矮腥黑粉菌冬孢子萌发培养基筛选及其生理特性研究[A];第二次全国植物抗病虫和病害流行与控制学术研讨会论文集[C];2010年
4 高飞;高继国;高利;刘太国;陈万权;;小麦矮腥黑粉菌ISSR反应体系的建立与优化[A];植物保护科技创新与发展——中国植物保护学会2008年学术年会论文集[C];2008年
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1 弭娜;小麦矮腥黑粉菌冬孢子萌发条件及核糖体DNA多态性分析[D];吉林农业大学;2005年
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