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《吉林农业大学》 2008年
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禾谷孢囊线虫(Heterodera avenae sensu lato)分子特征分析

欧师琪  
【摘要】: 2005-2007年对中国的华北和西北地区进行禾谷孢囊线虫(cereal cyst nematode,CCN)的调查。结果表明9个省市37个县市都有禾谷孢囊线虫的发生。新分布省是陕西省和甘肃省。本研究表明河南省、河北省、北京、山东省、山西省、青海省、甘肃省、陕西省等地禾谷孢囊线虫土壤中的卵量已达到或超过危害水平。 本研究采用PCR技术扩增出CCN群体的核糖体基因(rDNA)的内转录间隔区(ITS)片段后用RFLP分析和建立系统关系树,对CCN群体进行分子鉴定和遗传分析。 河南郑州的9个CCN群体rDNA-ITS扩增片段长度约为1040bp,其中2个片段测序结果为1045和1047bp。与近缘种进行聚类分析,发现郑州CCN群体近缘于H.australis。 河南省郑州、青海省、陕西杨陵和内蒙古4地65个孢囊线虫群体采用PCR技术扩增得到rDNA-ITS片段。禾谷孢囊线虫的片段长度约1045bp,大豆孢囊线虫片段约1030bp,青海省HZXZ群体ITS扩增片段大小为1039bp,而CE18群体ITS仅有976bp。 以青海省DT2A序列为例,将河南省SF2、XS2和XS3,与德国H.avenae、印度H.avenae、中国H.avenae、H.australis、H.pratensis和H.arenaria序列共同比对。DT2A与中国禾谷孢囊线虫H.avenae仅差2个碱基,与H.australis差3个碱基,H.pratensis差6个碱基,应该是更接近中国H.avenae。XS2、XS3和SF2与H.australis均差5个碱基,与中国H.avenae差4~6个碱基,与H.pratensis差5~8个碱基,应该与H.australis更接近。YL4A和YL4B与中国H.avenae差2~3个碱基,与H.australis差3~4个碱基,与德国H.avenae差7~8个碱基,近缘种应该是中国H.avenae种。 青海孢囊线虫群体序列比对结果显示:DT2A、HY16B、HY16A、HY126A、HY114B、HZ13A、HHX8A、HY61A、ZZZZ2B、ZHZ164B、HY121B、HY111A、HY111B、HY112A、HY113B、DT141A、DT141B和DT143B这18个序列完全一致,来自大通县斜沟乡12、14;湟源县寺寨乡长岭村11、12;湟中县共和镇转嘴村16;湟源巴燕乡新寺村6;大通县桥头镇红河限村8,湟中县共和县苏尔吉村13,湟源16等10个地点。52个青海孢囊线虫群体与中国H.avenae、H.pratensis和H.australis比对结果显示:52个序列共有45个碱基差异,序列彼此间的差异仅在7个碱基以内;加入上述3个种比对则存在51个碱基差异,序列彼此间差异在10个碱基内。 以ITS序列基础用UPGMA方法建立的系统发育树的结果显示:郑州、青海、陕西杨陵和内蒙古的孢囊线虫群体都与序列比对时的近缘种聚类在同一个分支上,并且置信度达90%以上,CE18和C.estonica的置信度为100%。与中国H.avenae同支的青海孢囊线虫群体亲缘极近,认为来源可能是相同的,很有可能是某地发生或传入后,向其它地区扩散的。郑州CCN群体与H.australis成簇。遗传距离的微弱差异,说明中国H.avenae,H.australis及H.pratensis亲缘关系相当近,而中国H.avenae、德国H.avenae和印度H.avenae遗传距离比前三者间的要远些。系统树显示Avenae组和Schachtii组亲缘关系较近,和Goettingiana组遗传距离相对较远。 所有CCN孢囊群体的rDNA-ITS的PCR产物用HinfⅠ,TaqⅠ,HpaⅡ,HaeⅢ,PstⅠ,AluⅠ6种酶酶切。HaeⅢ、HinfⅠ和HpaⅡ酶切结果可以看出所有CCN孢囊群体被分成4组:Avenae组,Schachtii组,Goettingiana组和Cactodera属。PstⅠ和AluⅠ的酶切结果明显看出杨陵群体的异质性。TaqⅠ的RFLP图谱明显观察到Avenae孢囊群体间的区别:河南群体与H.australis酶切结果是一致的,青海CCN群体与中国H.avenae的酶切图谱一致,杨陵CCN群体酶切结果较为复杂。 分离的孢囊进行形态学观察,河南CCN群体孢囊和阴门锥形态与H.australis形态描述相符,青海省群体HZXZ与H.urticae形态描述相符,其余CCN群体和H.avenae的描述相符合,CE18的孢囊形态是符合Cactodera属的描述。 综合形态学观察和分子分析结果认为:河南郑州CCN群体应视为H.australis;青海CCN群体中HZXZ群体是H.urticae,其它CCN群体为中国H.avenae;杨陵CCN群体较为复杂,可能是混合型,但仍是H.avenae;内蒙古CCN群体中CE18是Cactodera estonica,其他孢囊群体是H.glycines。国内尚未见报道H.australis、H.urticae和C.estonica。 所有序列注册在GenBank上,注册号从EU106164~EU106175,EU616683~EU616707和EU623603~EU623634。
【学位授予单位】:吉林农业大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:S432.45

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【同被引文献】
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中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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