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《长春中医药大学》 2012年
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树突状细胞的分离培养及HIV-1假病毒感染实验研究

朱娜  
【摘要】:目的:以人外周血来源的单个核细胞为前体细胞,建立体外快速分离和诱导培养未成熟树突状细胞(Immatural dendritic cell, iDC)的方法;构建携带增强型绿色荧光蛋白基因(Enhanced green fluorescent protein, EGFP)的HIV-1假病毒;通过HIV-1假病毒感染iDC实验探讨病毒与细胞的相互作用。 方法:采用Ficoll密度梯度离心和MACS磁珠分选系统,收集高纯度的CD14~+单核细胞;用rhGM-CSF、rhIL-4联合诱导CD14~+单核细胞,获得未成熟树突状细胞(iDC),应用流式细胞术鉴定细胞表面标记和抗原吞噬能力,用普通光学显微镜、扫描电镜和透射电镜观察细胞表面和内部结构特征;利用慢病毒包装系统构建携带EGFP基因的HIV-1假病毒,通过RT-PCR扩增HIV-1假病毒中的EGFP基因;最后利用HIV-1假病毒感染iDC,对HIV-1假病毒感染iDC后的基因组整合和转录水平进行检测,观察被感染iDC中EGFP基因的表达。 结果:流式细胞仪检测结果表明,CD14免疫磁珠技术获得CD14~+单核细胞纯度达94%以上,诱导分化第4天的iDC具有吞噬能力,CD195的表达在95%以上,普通光学显微镜、扫描电镜和透射电镜观察到细胞出现典型DC特征;构建的HIV-1假病毒通过RT-PCR结果显示扩增得到EGFP基因;HIV-1假病毒感染iDC后,在基因组整合和转录水平检测中都扩增得到了EGFP基因,荧光显微镜观察被HIV-1假病毒感染的iDC,观察到iDC表达绿色荧光蛋白。 结论:经过体外快速诱导培养获得大量具有典型特征的iDC,其可以应用于进一步实验研究;成功构建携带EGFP基因的HIV-1假病毒;HIV-1假病毒可以感染iDC,并将其遗传物质整合到iDC基因组中,并经过转录和翻译使iDC表达EGFP。
【学位授予单位】:长春中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R392

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