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《长春中医药大学》 2007年 硕士论文
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哈蟆油HPLC指纹图谱的研究及其在真伪鉴别中的应用

白雪媛  
【摘要】: 本课题“哈蟆油HPLC指纹图谱的研究及其在真伪鉴别中的应用”是哈蟆油系统质量控制方法中的一部分,是对现有哈蟆油质控方法的必要补充。旨在通过高效液相色谱法对哈蟆油样品进行研究,建立哈蟆油HPLC指纹图谱的共有模式,达到有效控制其质量的目的。本实验共收集到了18批待研究样品,其中正品哈蟆油15批,伪品哈蟆油(即青蛙与蟾蜍的输卵管)3批。通过系统溶剂法对正品哈蟆油进行提取,从中选择了95%乙醇作为哈蟆油HPLC指纹图谱研究的提取溶剂;结合紫外全波长扫描和试验的结果,我们选择了209nm作为检测波长;经过对大量流动相系统的考察,确定了乙腈—0.5%磷酸水溶液为其流动相,采取非线性的梯度洗脱。最后确定哈蟆油HPLC指纹图谱的色谱条件为:色谱柱:Kromasil C18(5μ100A TiANHE(?) TH 1025 250mm×4.6mm S/N:06L25514);流动相:乙腈—0.5%磷酸水溶液;柱温:室温;检测波长:209nm;进样量为15μl。在已筛选的色谱条件下,35分钟内就完成了哈蟆油HPLC指纹图谱的检测。用此方法对其余样品分别测定,并应用指纹图谱相似度评价系统软件对各样品图谱信息进行处理,最后选出11批优质正品哈蟆油样品生成哈蟆油HPLC指纹图谱共有模式,从中选出12个重复性好的色谱峰作为哈蟆油HPLC指纹图谱的特征峰。将生成的对照指纹图谱与伪品哈蟆油HPLC图谱进行比较,即可判断出真伪。经方法学验证,表明该方法具有良好的专属性、准确度、精密度、重复性、稳健性,测定范围在25μg/ml~100μg/ml之间。并以相似度大于0.85作为判定哈蟆油药材合格与否的标准。本实验不仅建立了哈蟆油的HPLC指纹图谱,而且还首次成功地利用该方法对哈蟆油的真伪进行了鉴别,能够有效的监测哈蟆油的质量,作为其质量控制的手段,为名贵动物药哈蟆油的开发和利用奠定了基础。


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