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《东北师范大学》 2012年
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香菇凝胶样多糖的结构分析及生物活性研究

Rajab M.R. Kassim(卡西姆)  
【摘要】:蘑菇具有较高的食用和药用价值,被人类作为食物和药物使用。有些已经被开发成功能食品。担子菌包括多种蘑菇,其中绝大多数具有可见的子实体。香菇是一种寄生于枯木的担子菌,属于多孔菌科。这种蘑菇是最受欢迎的真菌之一,因为它含有多种生物活性物质,包括β-葡聚糖(如香菇多糖)、蛋白质和多肽等。这些物质已被证实具有较好的抗肿瘤和免疫调节活性。 目前,国际上已经有许多关于香菇子实体中水溶性多糖的提取、纯化及结构分析的研究报道,但未见系统分析全部多糖的研究。本研究着重对通过冻融方法分级得到未见报道的多糖级分,并对部分多糖级分进行体外抗增殖活性研究。 香菇子实体通过热水煮提,80%乙醇沉淀及Sevag试剂脱蛋白得到粗多糖WPLE。通过对WPLE进行冻融分级,得到一个高分散的胶状多糖级分I-WPLE。将其用2%氢氧化钠溶液溶解,并用50%醋酸中和,进一步冻融处理,10,000rpm离心20min,得到水溶性多糖级分I-WPLE-S,其具有广泛的分子量分布,从4KDa-1000KDao I-WPLE-S是中性多糖,主要含有半乳糖(7.14%)、葡萄糖(86.52%)及甘露糖(3.37%)。I-WPLE-S通过Sepharose CL-6B凝胶层析柱进一步分离纯化,得到I-WPLE-S1、I-WPLE-S2、I-WPLE-S3和I-WPLE-S4四个级分。用Sepharose CL-6B对I-WPLE-S1和I-WPLE-S2的均一性及分子量进行分析,结果显示这两个级分均具有单一对称峰,多分散系数(Mw/Mn)小于1.5,其中,I-WPLE-S2的分子量大于500KDa, I-WPLE-S1的分子量大于1000KDa。I-WPLE-S3和I-WPLE-S4的均一性及分子量分布采用高效凝胶渗透色谱法进行检测,结果显示这两个级分均具有狭窄且对称的峰,多分散系数小于1.5,它们的分子量分别为12.74和4.21KDa。 单糖组成结果分析显示I-WPLE-S1包含半乳糖(3.77%)、葡萄糖(94.84%)及甘露糖(5.16%); I-WPLE-S2仅含有葡萄糖(92.40%)及甘露糖(7.60%); I-WPLE-S3含有半乳糖(22.36%)、葡萄糖(65.81%)及甘露糖(11.84%); I-WPLE-S4仅含有半乳糖(6.14%)和葡萄糖(93.86%)。对I-WPLE-S2和I-WPLE-S4进行进一步的结构分析,通过NMR及FT-IR分析,结果显示I-WPLE-S2含有(l→3)-β-D-Glcp主链,单个的D-Man通过C-6位连接在主链上。I-WPLE-S4包含(l→6)-β-D-Glcp骨架结构,单个的D-Gal可能通过C-6连接在主链葡萄糖上。根据单糖组成结果、NMR及FT-IR分析,I-WPLE-S1可能为β-D-葡聚糖,而I-WPLE-S3是一个杂多糖,可能为甘露半乳葡聚糖。 此外,I-WPLE-S3和I-WPLE-S4对人结肠癌细胞系HCT-116和HT-29的体外抗增殖实验结果显示,两种多糖对HCT-116细胞不具有抗增殖活性,但是对HT-29细胞,在5mg/ml时与对照相比,具有显著的抑制作用,I-WPLE-S3的抑制率达到25%, I-WPLE-S4的抑制率为14%。
【学位授予单位】:东北师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:TS219

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