菰DNA渐渗及组织培养诱发水稻基因组表观遗传变异的研究

【摘要】： 表观遗传学(epigenetics)是指在DNA序列没有发生变异的情况下，基因表达的可遗传改变；它主要通过对DNA和／或组蛋白的共价修饰来实现。DNA甲基化的可遗传改变是表观遗传学的重要内容。 DNA甲基化在真核生物中普遍存在。虽然DNA甲基化的确切功能尚不十分清楚，但最新的观点认为，胞嘧啶甲基化至少在调控基因表达和基因组防御两个方面具有重要作用。 McClintock(1984)曾经预言，远缘杂交对植物基因组是一种强烈冲击，在这种情况下，基因组内处于沉默状态的转座子(包括反转座子)可能被激活，从而对这一冲击发生应答并会引起基因组的重建。远缘杂交是许多天然植物种群的一个显著特性，其结果往往是通过多倍体化或者在二倍体水平上形成新物种。考虑到反转座子在植物基因组内存在的普遍性，可以推测至少在某些情况下，反转座子的激活及其对基因表达的影响促进了杂交后的物种形成和新物种对环境的适应性。然而，目前还没有直接的证据表明适应性或物种形成与反转座子活性之间存在必然联系。 菰为禾本科稻族的野生种，与水稻为同族异属。我们实验室早期的工作发现，将菰的基因组DNA导入水稻能够诱发水稻基因组产生表观遗传变异，包括DNA甲基化变异和反转座子的激活。本论文在我们实验室已有工作的基础上，对菰DNA渐渗诱导的水稻表观遗传变异进行了更为深入的研究，包括：①利用TAIL-PCR方法克隆了渐渗系RZ-2和RZ-35中Tos17反转座子插入位点的侧翼序列，并利用多种甲基化敏感内切酶消化和Southern杂交研究了这些侧翼序列的DNA甲基化变异。结果表明，在所得的8个序列中，除一个序列的功能未知外，其余7个序列均与已知功能基因同源，这说明由于外源基因导入激活的Tos17反转座子与组织培养激活的相似，即Tos17反转座子优先插入基因组中低拷贝的基因区域；Southern杂交结果表明，菰DNA渐渗诱发了Tos17插入位点的侧翼序列发生DNA甲基化变异。对从组织培养的RZ-2和RZ-35的再生苗中克隆到的8个Tos17插入位点侧 翼序列的分析表明，Ji 4“1、为向－人’列，且与未培养渐渗系中的、个 侧翼序列相同（均为permease人 说明组织培养过程可能没有重新激活 RZ士和 RZ刁5中己沉默的Tosl7反转座子，所克降的侧翼序列。帕g均 为山于揽 DNA渐渗惭天的『fOS 17的插入；②利用多种甲 ：l士化敏感内 ＊吓饲讹和＊CR扩增灯次系纹地川I穴了前＊N八渐参秀发的几s17反 转座’厂目身的 DNA小兑化变汁，结果表明梳 DNA渐惨激活的 Ah。17 反转座广的胞屹归人牛了对称及不对称的＊NA甲丛化”过异，巾J 上L腺 咄11》匕发十了HI4化变X；③组织培养可诱发水稻基囚纠中gyPSy类 ］二转座厂发卜DNA ql％化变X，而未检测主扼DNA渐渗诱发gyPSy 殆反转座了的DNA小－’；［化变歼；④攸DNA渐渗和组织培并能够诱 人水们丛山组中棱抛仆KN八汁山发’I：＊N八中基化艾汗。 迎过对1l问地的m陀，形J。厂狐＊＊A渐渗和组织培养均能够润 发水创基冈组发生扒队迟传变斤，11f二首的作用有所个同；灭观巡传 业汁介人然远缘杂交介川的物f。Z。形成和组川培养中的什细胞尤什系变 汁十。啊沾趴X人啦公仆川

【关键词】：菰 水稻 渐渗杂交系 表观遗传变异 DNA甲基化 反转座子 组织培养
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2002
【分类号】：S511.035.3
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