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《东北师范大学》 2002年
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细胞核肌动蛋白与RNA聚合酶Ⅱ关系的研究

朱筱娟  
【摘要】: 肌动蛋白是普遍存在于各类细胞的高度保守的蛋白质,参与许多重要的生命活动。近年来许多生物化学分析及免疫细胞化学的研究结果表明,肌动蛋白除了在细胞质中发挥作用外,还参与细胞骨架和细胞核的功能活动。目前,对细胞核肌动蛋白是否参与RNA聚合酶Ⅱ介导的基因转录活动还存在争议。本文以ConA激活的淋巴细胞和HeLa细胞为实验材料,从不同角度研究了细胞核肌动蛋白与RNA聚合酶Ⅱ相互作用,并对细胞核肌动蛋白参与RNA聚合酶Ⅱ的作用机制进行了探讨。得到的主要结果和结论如下: 1、ConA激活的淋巴细胞,可观察到细胞核增大、染色质解集缩、核仁增大等一系列基因活化的现象。流式细胞术分析静止期及活化后4小时的淋巴细胞,发现细胞总肌动蛋白不变,F-肌动蛋白逐渐减少。进一步用抗肌动蛋白抗体进行的免疫印迹分析结果表明,T淋巴细胞活化初期细胞核肌动蛋白逐渐增加并与核骨架紧密结合。 2、荧光显微镜下观察经抗肌动蛋白抗体和RNA聚合酶Ⅱ抗体双标记染色的细胞,结果表明肌动蛋白除了在细胞质有分布外还在细胞核中浓集,细胞核内肌动蛋白荧光的分布与强弱与RNA聚合酶Ⅱ荧光的分布和强弱具有很好的一致性。有肌动蛋白荧光分布的区域也有RNA聚合酶Ⅱ的荧光存在,肌动蛋白荧光强的区域,RNA聚合酶Ⅱ荧光也强,反之亦然。肌动蛋白和RNA聚合酶Ⅱ的免疫共沉淀分析显示二者间具有相互作用的关系。虽然,细胞核内也存在鬼笔环肽识别的F-肌动蛋白,但未见与RNA聚合酶Ⅱ共定位的现象,说明在细胞核中与RNA聚合酶Ⅱ结合的是G-肌动蛋白,而不是F-肌动蛋白。 3、α-鹅膏毒蕈是一种转录抑制剂,其作用机制是刺激RNA聚合酶Ⅱ大亚基降解而抑制基因转录活动。当它抑制RNA聚合酶Ⅱ介导的基因转录活动时,细胞核区域形成广泛的F-肌动蛋白。用肌动蛋白聚合的抑制剂细胞松弛素B处理细胞时,肌动蛋白与RNA聚合酶Ⅱ 并定位现象试弱.细胞核豹出抑制剂LMB处理的细胞,可以观察到细 胞幢卜肌动员白异懦戳月,同时表羽纲瞩筏分裂而细回鹰不分缨等一 系列绢回烬p巴的特征.这些绪果汉瞩当RNA骏合肘o活脓到抑制 饵。习鲫以剪潭白渊勿申炉炸即合渊印脓,湘则中叩归 受到傲坏阑在铀困收内异常识毙时,会严重影响凶M瘦合囱的分布和 状态. 4、RNA聚合酶11与细胞核肌球蛋白!的免疫共定位现象和RNA 聚合酶H与肌动蛋白的免疫共定位特征十分相似。用ILNA聚合酶11、 肌动蛋白和细胞核肌球蛋白!进行的蛋白质免疫共沉淀的结果表明, 它们三者之间存在相互作用的关系。进一步用RNA聚合酶11和染色 质改构复合物抗体进行的蛋白质免疫共沉淀结果显示,二者也具有相 互作用的关系.松沼上逐芯呆,戮们括回,纲回挽肌动蛋白和肌冰匹 囱汕问汹了m砒虬们“庇办辱的赴由恬纽怎的,恤化仓御伎也 参与了粱包度为迎幽渊劫而浙的玻胸词匹,此过狸中腼宴的。 量可能由肌动蛋白激活了肌球蛋白的Ah$活性,水解Al,转换能量, 推动DNA和转录相关复合物的运动。
【学位授予单位】:东北师范大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:Q26

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