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《东北师范大学》 2008年
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受体型酪氨酸磷酸酯酶PTPRO表达调控机制的研究

徐鑫  
【摘要】: 人PTPRO是受体型酪氨酸磷酸酯酶家族的一员,其功能主要涉及肾脏肾小球细胞的结构和功能,神经组织中轴突的生长和导向,以及肿瘤抑制。与其功能相对应,PTPRO主要表达于不同发育时期的肾脏组织和神经组织,而在很多肿瘤细胞中则通过DNA甲基化沉默。例如,在肾脏中,PTPRO表达于发育早期的肾小球细胞顶部和发育成熟的肾小球足细胞顶部;在脑中,PTPRO最高表达出现于妊娠中后期,这一时期也是脑部轴突发生的主要时期;由高甲基化介导的PTPRO的沉默常见于不同的肿瘤和肿瘤细胞系中。尽管存在表达差异,但是我们对PTPRO表达的调控机制了解很少。 我们详细地研究了PTPRO表达调控的机制。首先,我们发现PTPRO是一个新的E2F1的靶基因。过表达E2F1能上调PTPRO的mRNA水平并且激活PTPRO启动子荧光素酶报告基因活性;PTPRO启动子上存在两个E2F1的结合位点;EMSA和ChIP实验表明E2F1能够结合于PTPRO的启动子。其次,我们发现一个小的microRNA簇—miR-17-92也能够调控PTRPO的表达。生物信息学分析发现PTPRO mRNA的3’UTR区存在miR-17-92的结合位点;报告基因的实验结果表明这些位点对于PTPRO mRNA的稳定性是重要的,miR-17-92能下调PTPRO的mRNA和蛋白水平。最后,我们发现E2F1和miR-17-92在细胞周期进程中协同调控PTPRO的表达。PTPRO的mRNA在细胞周期的S期上调,这与E2F1上调于G1/S期,以及miR-17-5p(miR-17-92家族的一个成员)上调于后S期的结果相一致。我们还分别检测了PTPRO启动子和3’UTR荧光素酶报告基因的活性,发现启动子的活性高峰出现在S早期,而3’UTR的活性则于S后期下降,这与E2F1和miR-17-92的表达是一致的。总之,我们发现PTPRO能够被E2F1和miR17-92协同调控。
【学位授予单位】:东北师范大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:Q343

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