收藏本站
《东北师范大学》 2009年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

HIV-1主要抗原蛋白在毕赤酵母和大肠杆菌中的重组表达

郝丽霞  
【摘要】: 人类免疫缺陷病毒(HIV)是造成艾滋病发生的病原体,自1981年美国报告首例AIDS以来,HIV已在全球迅速传播和扩散,其主要原因是基因组比较复杂而且变异程度高,这为诊断试剂和疫苗的研究带来了很大的难度。在机体感染HIV后,最先能检测到的是p24抗原,而后可以检测到外膜糖蛋白gp120和跨膜蛋白gp41等刺激产生的抗体。所以在新一代的HIV抗体诊断试剂盒中使用的包被抗原必须含多种组分,既要有HIV-1的核心抗原P24,还需要加入表面抗原gp120,gp41,HIV-2的表面抗原gp36等。考虑到HIV抗体诊断试剂中包被抗原的复杂性,因此本实验利用基因重组技术将编码p24蛋白基因整合到毕赤酵母GS115中,gp120和gp41编码基因分别导入到大肠杆菌BL21和M15中进行重组表达。 以质粒pT24为模板,PCR扩增出p24基因,以酵母分泌型表达载体pPIC9为载体,构建重组酵母表达质粒pPIC924。用限制酶SacI线性化后电转化毕赤酵母GS115,同酵母菌基因组重组,通过MM和MD培养基筛选在两种培养基生长良好的菌种后再经过PCR鉴定获得正确的酵母转化子,计算其整合率为83%,而且有很好的遗传稳定性。液体培养阳性转化子并用甲醇诱导重组蛋白的表达,表达产物以SDS-PAGE和Western blot进行分析,结果表明重组蛋白获得了正确的表达,产量为55.6mg/L。抗原蛋白经过离子柱纯化后应用间接ELISA法包被反应板,对阳性血清进行检测,结果表明酵母表达的重组p24抗原蛋白具有很好的抗原特异性。 选择gp120基因上抗原性较强的区段设计引物,PCR扩增出截短的外膜糖蛋白gp120基因,构建表达质粒p120s。将该重组质粒和pT41质粒分别转化大肠杆菌BL21和M15,IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测目的蛋白。结果显示gp120s实现了可溶性表达,表达量占菌体总蛋白的17.9%。gp41以包涵体的形式表达,表达量占菌体的24.6%。包涵体经过洗涤和变性处理后,变性的包涵体蛋白复性效率是14.1%。利用镍柱亲和层析法对以上两种大肠杆菌表达的重组蛋白进行纯化,纯度分别为63.1%和89%。ELISA结果显示了重组抗原蛋白gp120s和gp41均具有良好的抗原性。 本论文在酵母和大肠杆菌两种表达系统中表达了HIV-1重要的抗原蛋白p24,gp120s和gp41,而且都具有较好的抗原特异性。这三种重组抗原蛋白可以为研究抗原蛋白的特性奠定基础,也为HIV-1诊断试剂和亚单位疫苗的开发提供了基础。
【学位授予单位】:东北师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R392

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谭寿南;;HIV-1 gp120分子结构针对机体免疫应答的研究进展[J];中外医疗;2011年23期
2 穆萍萍;孙钦峰;;牙龈卟啉单胞菌对人类免疫缺陷病毒-1致病性的影响[J];牙体牙髓牙周病学杂志;2011年07期
3 孙伟;王蕊;史宣玲;傅阿丽;焦艳梅;吴昊;;HIV-1中国流行株假病毒的建立及其初步应用[J];中国病毒病杂志;2011年04期
4 张智锦;胡建平;;HIV-1整合酶结构的研究进展[J];湖北农业科学;2011年15期
5 贾峥;;HIV-1耐药性的研究进展[J];中国生物制品学杂志;2011年08期
6 朱瑞新;王飞;刘琦;康廷国;;IOPY/ISPY类HIV-1逆转录酶抑制剂的定量构效关系研究[J];化学学报;2011年15期
7 王建新;王敏;张同存;刘新奇;;HIV-1CRF07B/C亚型gp41的表达、纯化和初步结构分析[J];生物技术进展;2011年01期
8 宋静静;吴昊;;HIV-1潜伏储存库及其控制策略[J];中国病毒病杂志;2011年04期
9 ;[J];;年期
10 ;[J];;年期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 刘新泳;展鹏;李东岳;陈文敏;;抗耐药性HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂的设计、合成与活性研究[A];2011年全国药物化学学术会议——药物的源头创新论文摘要集[C];2011年
2 魏飞力;汪习城;刘立峰;陈德喜;;HIV-1感染者脑脊液中病毒包膜基因分析[A];中华医学会第五次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2011年
3 胡勤学;;(HIV-1粘膜感染中的侵入、传播和抑制)(英文)[A];2004年中国科学院新生病毒性疾病控制学术讨论会摘要集[C];2004年
4 鲍毅;王晓辉;陈琳;何太平;;深圳市HIV-1不同亚型分布与传播途径的关联性分析[A];中华医学会第五次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2011年
5 段呈玉;;HIV-1病毒基因调控蛋白对胞内艾滋病病毒干预作用研究进展[A];中华中医药学会防治艾滋病分会第八次年会论文集[C];2011年
6 焦艳梅;吴昊;;研究ART治疗对使用不同辅助受体HIV-1病毒的影响[A];中华医学会第五次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2011年
7 李丽娜;苏莉;张晓昀;黄晓燕;单志杰;翟红林;;关于HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂药物的三维定量构效关系和分子对接研究[A];第十一届全国计算(机)化学学术会议论文摘要集[C];2011年
8 李东岳;陈文敏;展鹏;Christophe Pannecouque;Erik De Clercq;刘新泳;;HIV-1非核苷类逆转录酶抑制剂etravirine类似物的设计、合成与活性评价[A];2011年全国药物化学学术会议——药物的源头创新论文摘要集[C];2011年
9 唐蔚;王辉;张洁云;何清;;HIV-1高暴露持续血清阴性者非特异性T细胞免疫功能的研究[A];全国第3届中西医结合传染病学术会议暨中国中西医结合学会传染病专业委员会第2届委员会议论文汇编[C];2010年
10 李威;吴昊;;伽马干扰素与b-连环蛋白之间的调控机制以及对HIV-1复制的影响[A];中华医学会第五次全国艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全国热带病学术会议论文汇编[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 李天书;刘云涛;新生病毒敲响警钟[N];中国医药报;2004年
2 刘汉权;穿心莲有望成为抗艾滋病新药原料[N];中国中医药报;2005年
3 吴立明;艾滋病的中医药研究进展[N];中国医药报;2002年
4 记者 郑灵巧;关小艾滋病危险“窗口”[N];健康报;2000年
5 天亮;从种子到果实的艰辛路途——CRIXIVAN简史[N];中国高新技术产业导报;2001年
6 一凡;科学论争与认知局限[N];中国妇女报;2004年
7 美国宾州大学医学院艾滋病中心博士后、中南大学湘雅二医院教授 郑煜煌;艾滋病病毒感染者能否生育[N];大众卫生报;2002年
8 冯祥;窗口期与病毒检测[N];保健时报;2004年
9 记者 李颖 通讯员 段文利;我国学者在艾滋病患者房水中首次找到HIV病毒载量[N];科技日报;2005年
10 ;白背叶楤木皂苷具有较强的抗肿瘤活性[N];中国中医药报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 马晓东;非核苷类HIV-1逆转录酶抑制剂研究 Ⅰ:CH_2-DAPY衍生物的结构优化及构效关系研究 Ⅱ:BP类似物的分子设计、合成及构效关系研究[D];复旦大学;2011年
2 江华洲;男男性行为人群HIV-1早期感染检测策略及新发感染率研究[D];中国疾病预防控制中心;2011年
3 刘永健;云南省HIV-1流行毒株及HIV早期感染病毒准种的基因变异和分子进化研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
4 靳昌忠;HIV-1性传播的关键分子DC-SIGN特异性表达机制研究[D];浙江大学;2011年
5 胡国平;虚拟筛选方法评价和靶向HIV-1整合酶与人类LEDGF/p75蛋白相互作用界面的抑制剂发现研究[D];华东理工大学;2012年
6 李娜;miR-34a抑制肝癌细胞侵袭转移和甲型减毒嵌合流感病毒诱导HIV-1广谱中和抗体的分子机制研究[D];吉林大学;2011年
7 苏锟楷;HIV-1整合酶S119D/E2C融合蛋白的定向整合及其整合位点的预测和分析[D];浙江大学;2011年
8 刘智慧;寡肽(OGP、HIV-1 tat~[47-57])的合成、聚合及功能研究以及NRSF/REST在转录调控方面的研究[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2004年
9 韩晓旭;我国部分地区HIV耐药变异和结构基因特征的研究[D];中国医科大学;2006年
10 贾峥;HIV-1表型耐药以及基因型耐药的检测与分析[D];北京协和医学院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘铁军;HIV-1生物性克隆病毒的分离与鉴定及蕨麻提取物体外抗HIV活性研究[D];河北医科大学;2011年
2 谢美榕;福建省HIV-1耐药基因变异现况及MSM HIV-1感染者流行毒株亚型分析研究[D];福建医科大学;2011年
3 侯俊;HIV p24抗原的表达、单克隆抗体的制备和初步应用[D];中国人民解放军军医进修学院;2002年
4 瞿小旺;1.中国株CN54HIV-1Pol P66/P51在大肠杆菌中的表达与纯化  2.鼠IL-12和IL-23作为基因佐剂与HIV-1 DNA疫苗共免疫研究[D];华中农业大学;2004年
5 郝丽霞;HIV-1主要抗原蛋白在毕赤酵母和大肠杆菌中的重组表达[D];东北师范大学;2009年
6 朱娜;树突状细胞的分离培养及HIV-1假病毒感染实验研究[D];长春中医药大学;2012年
7 李平;HIV-1整合酶与抑制剂相互作用的分子模拟研究[D];北京工业大学;2010年
8 王遥;以HIV-1整合酶与gp41为靶点的药物设计[D];北京工业大学;2011年
9 张瑛;宽苞水柏枝抑制HIV-1复制有效成分及其构效关系的研究[D];北京协和医学院;2011年
10 王文波;诱导HIV-1中和抗体的膜蛋白抗原的优化和改造[D];中国药品生物制品检定所;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026