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《黑龙江大学》 2011年
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玉米螟生防工程菌株构建的研究

张一桐  
【摘要】:玉米螟是世界性重大农业害虫之一,危害严重且分布极广。因其繁殖快、世代多以及较强的农药抗性,对其进行化学防治将面临越来越大的困难。因此,寻找高效、安全、环保的农药替代物已成为亟待解决问题。 在本研究中,以玉米和亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis作为研究对象,在明确茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MJA)诱导玉米抗性反应影响亚洲玉米螟生长发育基础上通过双向电泳和MS技术鉴定了60个响应MJA处理的差异表达蛋白,并对其进行了功能分析。对4个重要植物防御相关蛋白编码基因构建了原核表达载体并成功诱导了重组蛋白,利用生物测定的方法验证了重组蛋白对亚洲玉米螟生物学活性的影响。其中,pET28a-TRX和pET28a-PRP表达的重组蛋白对亚洲玉米螟幼虫的生长发育产生了显著影响,生长抑制率分别达30.33%和34.14%。pET28a-GRBP表达的融合蛋白亦对蛹重有显著影响,这暗示我们所获得的玉米防御蛋白可能是一种良好的植物抗虫蛋白。 谷胱甘肽-S-转移酶是昆虫体内一类重要解毒酶系,它对许多有毒化合物具有代谢消化作用,从而增强昆虫的抗性。采用RT-PCR和RACE技术从亚洲玉米螟中肠中克隆了一个谷胱甘肽-S-转移酶基因,将其命名为OfGST,并进行了生物信息学分析。以此为基础,构建了原核表达载体并进行融合蛋白诱导表达,以纯化的重组蛋白制备了多克隆抗体。Western blot分析显示该解毒酶经丁布诱导后表达量增加,至24h时最大。同时,利用表达载体L4440构建了RNAi重组质粒并将其导入受体菌HT115中,经IPTG诱导获得了表达目的dsRNA的RNAi工程菌。自然饲喂取食法进行干扰效果检测表明,与对照组相比,干扰组亚洲玉米螟幼虫死亡率高达54%,初步证明我们成功构建了亚洲玉米螟谷胱甘肽-S-转移酶基因的RNAi工程菌,这为农业上对亚洲玉米螟进行生物防治提供了一条新途径。
【学位授予单位】:黑龙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S476

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【引证文献】
中国硕士学位论文全文数据库 前2条
1 林亨咪;玉米抗虫蛋白基因原核表达载体构建及活性研究[D];黑龙江大学;2013年
2 杨泽众;亚洲玉米螟GSTs RNAi干扰载体构建及功能研究[D];黑龙江大学;2013年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前1条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 杨帆;水杨酸、茉莉酸甲酯诱导黄瓜对西花蓟马(缨翅目:蓟马科)的抗性[D];华中农业大学;2009年
2 王利平;瑞氏钝绥螨人工饲养及其对朱砂叶螨的捕食作用[D];华中农业大学;2010年
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6 赵学娟;油桃园节肢动物群落动态分析及害虫与天敌的关系研究[D];安徽农业大学;2010年
7 马小蕊;几种生物农药对甘蓝田节肢动物群落的影响[D];安徽农业大学;2010年
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10 张良;苜蓿叶象甲自然种群生命表研究[D];新疆农业大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 胡志凤;孙文鹏;孙雪;王学顺;李洪波;周彦武;张奇;于洪春;;玉米螟的预测预报及防治技术[J];现代农业科技;2009年09期
2 赵国栋;卫正国;李兵;沈卫德;;家蚕谷胱甘肽-S-转移酶基因(BmGSTd1)的诱导表达定量分析[J];蚕业科学;2010年01期
3 桂连友,刘树生,陈宗懋;外源茉莉酸和茉莉酸甲酯诱导植物抗虫作用及其机理[J];昆虫学报;2004年04期
4 张婷;卫正国;高瑞娜;王瑞娴;赵国栋;李兵;沈卫德;;芸香苷对家蚕谷胱甘肽-S-转移酶部分基因的诱导表达[J];昆虫学报;2011年01期
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中国博士学位论文全文数据库 前5条
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中国硕士学位论文全文数据库 前3条
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【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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中国重要报纸全文数据库 前7条
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3 屈光明 陈扬;我国生物农药研制前景广阔[N];国际经贸消息;2001年
4 记者 钟燕平;首届“中国植物保护学会科学技术奖”颁奖[N];农民日报;2008年
5 云南中科生物产业有限公司;利用昆虫信息素治虫[N];河北科技报;2002年
6 记者 张桂敏;菲律宾转基因抗虫玉米提高单产37%[N];农资导报;2005年
7 李闻芝;种印楝树开发印楝素前景广阔[N];中国乡镇企业报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
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7 魏洪义;低致死剂量杀虫剂处理幼虫后对成蛾化学通讯系统的影响[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2004年
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9 白树雄;转基因抗虫玉米次生代谢物质的变化及对亚洲玉米螟寄生性天敌腰带长体茧蜂的影响[D];中国农业科学院;2011年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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3 郭建青;亚洲玉米螟糖原磷酸化酶基因的克隆及表达分析[D];中国农业科学院;2013年
4 王滔;亚洲玉米螟越冬幼虫滞育相关蛋白分析[D];吉林大学;2013年
5 靳军灵;亚洲玉米螟越冬幼虫饮水前后蛋白质组学解析[D];吉林大学;2011年
6 袁志华;亚洲玉米螟寄主种类及其对寄主植物的选择性研究[D];中国农业科学院;2013年
7 周琼;Cry1Ac对亚洲玉米螟的影响及在亚洲玉米螟—中华草蛉间的传递[D];扬州大学;2013年
8 于永涛;玉米对亚洲玉米螟抗性的QTL分析[D];河北农业大学;2003年
9 李光涛;亚洲玉米螟Cry1Ab抗性种群的生物学及其抗性遗传规律研究[D];中国农业科学院;2004年
10 赵秀梅;亚洲玉米螟绿色防控技术田间防效测定与评价[D];中国农业科学院;2012年
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