收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

玉米螟生防工程菌株构建的研究

张一桐  
【摘要】:玉米螟是世界性重大农业害虫之一,危害严重且分布极广。因其繁殖快、世代多以及较强的农药抗性,对其进行化学防治将面临越来越大的困难。因此,寻找高效、安全、环保的农药替代物已成为亟待解决问题。 在本研究中,以玉米和亚洲玉米螟Ostrinia furnacalis作为研究对象,在明确茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MJA)诱导玉米抗性反应影响亚洲玉米螟生长发育基础上通过双向电泳和MS技术鉴定了60个响应MJA处理的差异表达蛋白,并对其进行了功能分析。对4个重要植物防御相关蛋白编码基因构建了原核表达载体并成功诱导了重组蛋白,利用生物测定的方法验证了重组蛋白对亚洲玉米螟生物学活性的影响。其中,pET28a-TRX和pET28a-PRP表达的重组蛋白对亚洲玉米螟幼虫的生长发育产生了显著影响,生长抑制率分别达30.33%和34.14%。pET28a-GRBP表达的融合蛋白亦对蛹重有显著影响,这暗示我们所获得的玉米防御蛋白可能是一种良好的植物抗虫蛋白。 谷胱甘肽-S-转移酶是昆虫体内一类重要解毒酶系,它对许多有毒化合物具有代谢消化作用,从而增强昆虫的抗性。采用RT-PCR和RACE技术从亚洲玉米螟中肠中克隆了一个谷胱甘肽-S-转移酶基因,将其命名为OfGST,并进行了生物信息学分析。以此为基础,构建了原核表达载体并进行融合蛋白诱导表达,以纯化的重组蛋白制备了多克隆抗体。Western blot分析显示该解毒酶经丁布诱导后表达量增加,至24h时最大。同时,利用表达载体L4440构建了RNAi重组质粒并将其导入受体菌HT115中,经IPTG诱导获得了表达目的dsRNA的RNAi工程菌。自然饲喂取食法进行干扰效果检测表明,与对照组相比,干扰组亚洲玉米螟幼虫死亡率高达54%,初步证明我们成功构建了亚洲玉米螟谷胱甘肽-S-转移酶基因的RNAi工程菌,这为农业上对亚洲玉米螟进行生物防治提供了一条新途径。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 朱文娴;王丽鸳;成浩;房婉萍;黎星辉;;催化合成茶氨酸的基因工程菌的构建及重组基因的表达[J];江苏农业学报;2008年03期
2 王丽英;管致和;;欧洲玉米螟及亚洲玉米螟外部结构扫描电镜观察初报[J];中国农业大学学报;1985年01期
3 杨本立;;云南玉米螟研究快报[J];云南农业大学学报;1989年01期
4 王振营;低温贮藏对亚洲玉米螟卵生活力的影响[J];植物保护;1991年01期
5 李建平,王蕴生,谢为民,杨桂华;中国北部亚洲玉米螟[Ostrinia furnacalis(Guene)]生态型的初步研究[J];玉米科学;1992年00期
6 陈中义,林敏;首例属间遗传工程微生物进入商品化生产[J];生物技术通报;1998年06期
7 田正仁,赵淑艳,胡忱孝,杜冰;一代亚洲玉米螟超长期预报[J];植保技术与推广;1994年01期
8 王开运,慕立义;亚洲玉米螟对氰戊菊酯抗性遗传的研究[J];华东昆虫学报;1995年02期
9 胡学难,梁广文,曾玲;斯氏线虫对亚洲玉米螟种群的控制作用[J];华南农业大学学报(自然科学版);2004年02期
10 王振营,何康来,邢珍娟,白树雄,文丽萍;不同类型玉米组织对亚洲玉米螟幼虫存活和生长发育的影响[J];中国农学通报;2004年05期
11 忻亦芬;刘志娴;马绍元;徐文贵;;飞机喷洒Bt及Bt混剂防治亚洲玉米螟试验[J];沈阳农业大学学报;1989年01期
12 谭永中;注意防止亚洲玉米螟为害柚果[J];中国南方果树;1992年04期
13 宋宏国,张瑞霞,高俊峰,袁福英;长白山西南坡亚洲玉米螟天敌种类调查[J];吉林农业科学;2001年06期
14 胡学难,梁广勤,梁广文;斯氏线虫颗粒剂对亚洲玉米螟的控制作用[J];江西农业大学学报(自然科学版);2004年03期
15 张国洲,王亚维,赵善欢;瑞香狼毒提取物对亚洲玉米螟的生物活性研究[J];湖北农学院学报;1999年04期
16 胡学难,梁广文,庞雄飞;利用生命表技术评价甜玉米品种对亚洲玉米螟的抗性[J];中国农业科学;2001年05期
17 李元喜,戴华国,姜金林,符文俊,孙智婵;亚洲玉米螟卵对3种赤眼蜂的适合性比较[J];南京农业大学学报;2002年01期
18 张帆,孙光芝,李赤,孟昭君,李忠友;高效寄生亚洲玉米螟赤眼蜂种及品系田间防治效果[J];中国生物防治;2004年04期
19 于丽艳;;玉米螟发生规律与防治现状及对策[J];农业科技通讯;2009年02期
20 汪羞德;;亚洲玉米螟对甜玉米产量损失的影响[J];上海农业科技;1988年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李毓冰;刘春勇;陈月华;任改新;;韭蛆病原菌Bt TN-189cyt基因的克隆及工程菌株的构建[A];全国生物防治暨第八届杀虫微生物学术研讨会论文摘要集[C];2000年
2 生举证;朱希强;凌沛学;郭学平;张天民;;基因工程法构建透明质酸生产菌株[A];山东生物化学与分子生物学会2009年学术会议论文汇编[C];2009年
3 林凡;;水稻联合固氮工程菌株的研究与开发[A];新世纪 新机遇 新挑战——知识创新和高新技术产业发展(下册)[C];2001年
4 周莉娟;郑伟文;Janet.K.Jansson;;gfp/luxAB双标记载体在工程菌株YKT中的转化及表达检测[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年
5 周大荣;文丽萍;何康来;宋彦英;;亚洲玉米螟对玉米的致害机制初探[A];“植物病虫害生物学研究进展”——植物病虫害生物学国家重点实验室研究论文选[C];1995年
6 阮红;曹旭;郑强;范立梅;徐志南;;γ-聚谷氨酸工程菌株的构建[A];华东六省一市生物化学与分子生物学学会2006年学术交流会论文集[C];2006年
7 周淑香;鲁新;;不同化性亚洲玉米螟的单倍型分析[A];植保科技创新与病虫防控专业化——中国植物保护学会2011年学术年会论文集[C];2011年
8 宋彦英;何康来;司焕增;周大荣;;玉米螟人工大量繁殖研究:Ⅲ.噻菌灵对亚洲玉米螟生长发育的影响[A];“植物保护21世纪展望”——植物保护21世纪展望暨第三届全国青年植物保护科技工作者学术研讨会文集[C];1998年
9 何康来;周大荣;宋彦英;;亚洲玉米螟雄蛾趋向性诱源的行为研究[A];“植物病虫害生物学研究进展”——植物病虫害生物学国家重点实验室研究论文选[C];1995年
10 王振营;周大荣;;野生的与人工饲养的亚洲玉米螟成虫在实验室条件下交尾行为的研究初报[A];北京昆虫学会成立四十周年学术讨论会论文摘要汇编[C];1990年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 曹利民;基于代谢工程理论构建酵母菌株提高乙醇产量的研究[D];天津大学;2009年
2 吴酬飞;高效降解生氰糖苷的工程菌株构建与亚麻籽发酵脱毒研究[D];中山大学;2012年
3 池小琴;酿酒酵母海藻糖代谢工程与抗逆性相关机制研究[D];浙江大学;2010年
4 康振;大肠杆菌系统改造及琥珀酸和5-氨基乙酰丙酸合成途径的构建[D];山东大学;2011年
5 王正亮;球孢白僵菌两种甘露醇脱氢酶及五种过氧化氢酶的功能分析与对鳞翅目幼虫高口服毒力的工程菌株构建[D];浙江大学;2011年
6 涂小云;亚洲玉米螟滞育和生物学特性地理变异的研究[D];江西农业大学;2011年
7 李菁;基于分子标记和Wolbachia感染检测的亚洲玉米螟种群遗传分化与基因流研究[D];中国农业科学院;2010年
8 徐丽娜;Cry1Ab抗性亚洲玉米螟对不同Bt毒素的交互抗性及其产生的分子机理[D];中国农业科学院;2010年
9 郑爱萍;微生物来源的防病、杀虫相关因子的分离与功能解析研究[D];四川农业大学;2004年
10 卫广森;新生仔猪大肠杆菌性腹泻K_(88)ac-ST_1-LT_B三价基因工程灭活疫苗的研究与应用[D];南京农业大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张一桐;玉米螟生防工程菌株构建的研究[D];黑龙江大学;2011年
2 汪黎明;几株球孢白僵菌基因工程菌的遗传稳定性[D];安徽农业大学;2011年
3 窦鑫;聚磷相关基因的克隆、鉴定及高效聚磷工程菌株的构建[D];中国农业科学院;2011年
4 洪敏;酶法生产β-丙氨酸的研究[D];浙江工业大学;2010年
5 李艳;铜抗性全细胞传感器的构建和表达[D];内蒙古师范大学;2011年
6 郝瑞颖;高产甘油与谷胱甘肽酿酒酵母菌株的构建[D];西北农林科技大学;2012年
7 王伟业;亚洲玉米螟发生规律及防治技术研究[D];黑龙江大学;2010年
8 田生荣;苯甲酰脲类杀虫剂对亚洲玉米螟生长发育和生殖行为的影响[D];江西农业大学;2011年
9 任小芳;苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白基因Vip3Aa在虫生真菌球孢白僵菌中的表达[D];安徽农业大学;2011年
10 徐琳琳;转hrpZ_(Psgl2)基因的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)工程菌株的构建[D];吉林农业大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;耐热植酸酶基因工程菌株构建及第二代高效、高产植酸酶[N];云南科技报;2003年
2 周航;生物材料的保藏要求及其是否造成说明书公开不充分[N];中国知识产权报;2011年
3 ;亚洲玉米螟成虫扩散规律[N];农民日报;2001年
4 刘成刚 左朝胜;复能与罗氏携手人类重组蛋白研发[N];科技日报;2006年
5 记者 陈卫东;我破解基因工程产业化难题[N];科技日报;2007年
6 叶国标;为国家一级产业化项目找婆家[N];医药经济报;2001年
7 曹建明;促红细胞生成素(EPO)[N];中国经营报;2000年
8 隆华;科研科普双丰收[N];上海科技报;2007年
9 记者 陈荣发;生物基因技术可减少海洋污染[N];中国海洋报;2005年
10 白毅;我国首获旋毛虫新基因[N];中国医药报;2005年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978