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《黑龙江大学》 2012年
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紫杉醇产生菌生物发酵次生代谢产物分析的初步研究

高立国  
【摘要】:紫杉醇是一种四环二萜类化合物,是公认的广谱、活性强的抗癌药物之一。紫杉醇的来源主要有从植物组织中分离提取、化学合成、红豆杉细胞培养及微生物发酵等。目前,紫杉醇的生产还主要依赖于从红豆杉树皮中分离提取,但由于其在红豆杉中的含量极低,因此,寻找能够代替或可以转化为紫杉醇的紫杉烷类化合物和前体物质是非常必要的,且随着紫杉烷类化合物药源的增多,对于紫杉烷类化合物和前体物质的研究也不断深入。内生真菌生物发酵合成紫杉醇具有明显优势,其研究和开发已经越来越引起国内外研究者的广泛关注。 本论文以高产紫杉醇基因组重排的工程菌株HDFS4-26为出发菌株,通过生物反应器对其进行生物发酵,发酵结束后,利用下游工程技术,对发酵产物进行分离、纯化并鉴定。发酵液和菌体分别通过氯仿和混合溶剂乙酸乙酯:甲醇(V:V=1:1)进行萃取,回收有机相,减压蒸馏浓缩,得到浸膏;之后,将浸膏利用正相色谱、反相色谱、半制备高效液相、葡聚糖凝胶色谱及重结晶技术对浸膏进行分离纯化,以期获得紫杉醇或其类似物。本试验从菌株HDFS4-26发酵液中初步分离得到5个化合物,经1H-NMR、13C-NMR、HPLC-MS鉴定,3个为紫杉烷类二萜化合物,分别是紫杉醇(Taxol)、三尖杉宁碱(Cephalomannine)、巴卡亭Ⅲ(Baccatin Ⅲ);2个非紫杉烷类化合物,分别是beit5a-谷甾醇(β-sitosterol)和黄酮类化合物异牡荆素(Isovitexin)。 本试验所采用的纯化技术操作流程简单,分离效果明显,溶剂使用量小,为紫杉醇及其中间产物的分离纯化提供了有益的参考。
【学位授予单位】:黑龙江大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:Q936

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