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甜菜M14无融合生殖特异EST鉴定及全长获得

张绍军  
【摘要】:栽培甜菜与白花甜菜杂交而获得的单体附加系M14,其传递率是 97%,单体附加系的传递率如此高的原因是因为M14品系中存在无融合生 殖基因。为了克隆M14品系中无融合生殖相关基因,本实验室前期采用 抑制消减杂交方法,在甜菜开花的减数分裂期取样,建立了甜菜无融合 生殖系M14特异表达基因的抑制消减杂交文库,并对全部295个克隆进 行了测序,共测得211个序列表达标签(expressed sequence tags,ESTs), 用DNAMAN软件筛选可编码蛋白质的ESTs 28个。经NCBI在线相似性搜 索工具BLAST进行比对,挑选其中4个有参考价值的ESTs(Me341,Me263, Me219,Me206)作为获得全长基因的侯选ESTs。以这4个ESTs为模板设 计特异性引物,用RT-PCR法证实这4个基因在甜菜M14中均有特异表达。 通过快速扩增cDNA末端(rapid amplification of cDNA ends,RACE)法获 得Me341基因的全长。用生物信息学的方法进行分析,得知Me341基因 与菠菜中开花转录因子有88%的相似性,并推测该基因起始密码子于全 长的372bp处,编码230个氨基酸。今后需对该基因的结构和功能进一 步探索。


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