枯草芽孢杆菌拮抗菌株B29活性物质形成条件研究及其抗菌蛋白的分离纯化
【摘要】：
枯草芽孢杆菌B29菌株对多种植物病原真菌具有拮抗作用。在使用NYD培养基对枯草芽孢杆菌B29菌株进行培养，并以黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)作为指示菌时，B29菌株产生抗菌活性物质的最佳培养条件为：培养温度为30℃；培养基初始pH值7.5；装液量为250ml三角瓶装液75ml培养基；培养时间为120h。此时B29菌株发酵上清液对黄瓜枯萎病菌的绝对抑菌率为42.43％。
使用硫酸铵对B29菌株发酵液中的蛋白类物质进行粗提，最佳硫酸铵饱和度为30％～70％。分离到的抗菌蛋白粗提物对热具有一定的稳定性；对蛋白酶K具有一定的耐受性，对胰蛋白酶和胃蛋白酶较为敏感。
B29菌株抗菌蛋白粗提物经DEAE-52离子交换层析和Bio-Gel~(?)P-100凝胶层析，得到一个拮抗活性峰。此活性峰经C18反相HPLC柱检测，抗菌蛋白B29I纯度达97.81％。经SDS-PAGE和IEF-PAGE电泳显示为单一蛋白带，分子量约为42.3KD，等电点为5.69。抗菌蛋白B29I对孢子萌发的抑制作用主要是可推迟黄瓜枯萎病菌孢子萌发的时间，并可抑制芽管伸长，而且这种作用的效果较为强烈。
抗菌蛋白B29I经SDS-PAGE电泳后，交由军事医学科学院国家生物医学分析中心进行胶内酶切、肽段测序以及肽指纹图谱的检索。肽指纹图谱经检索未得到匹配结果，初步判定该蛋白为一种新蛋白。并通过肽段序列测定得到3个肽段的序列，分别为：KTHVLEDEFK；KGYQTGDFGAYLH；RTYEVAEESPVLGL。
【学位授予单位】：黑龙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2007
【分类号】：S476
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