收藏本站
《黑龙江八一农垦大学》 2011年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

牛轮状病毒的分离鉴定及其双抗体夹心ELISA方法建立

侯美如  
【摘要】:牛轮状病毒(Bovine Rotavirus,BRV)属于呼肠孤病毒科(Reoviridae)轮状病毒属(Rotavirus),为双股RNA病毒,共分11个节段,是引起犊牛病毒性腹泻的主要病原之一。该病多发生于1月龄以内的犊牛。犊牛感染后表现为精神沉郁、食欲废绝、水样腹泻、严重脱水、酸中毒,甚至死亡。 2008年11月至2009年4月,在大庆某牧场共收集140份新生牛腹泻样品,经A群轮状病毒抗原检测试剂盒确定为阳性的样品,处理后接种于MA104细胞,盲传数代后分离到一株牛轮状病毒。该分离毒于第九代出现明显的细胞病变。随着传代次数的增加,该分离毒出现细胞病变的时间提前,细胞病变程度亦随之加剧。病毒在MA104细胞上传至第11代时测得TCID50为10~(-7.6)/0.1mL。该病毒对5-碘脱氧尿核苷、酸、氯仿、乙醚均不敏感,不耐热,50℃加热60min可被完全灭活,Mg~(2+)对该病毒不具有保护作用;该病毒能被BRV参考株阳性血清中和;应用特异性引物,通过RT-PCR检测方法从病毒细胞培养物中扩增出BRV VP7基因中1 062bp的特异性片段,此片段与GenBank~(TM)中BRV毒株G10型VP7基因相应片段的核苷酸序列同源性为95. 4%、95.5%。以上结果表明所分离到的病毒为牛轮状病毒,命名为BRV DQ株。 利用差速离心法纯化的牛轮状病毒(BRV)分别免疫鼠和兔,制备了鼠抗BRV和兔抗BRV超免疫血清,并用层析方法进行了纯化,建立了检测BRV的双抗体夹心ELISA方法。该双抗体夹心ELISA的最佳反应条件为:兔抗BRV IgG包被浓度为10μg/mL,鼠抗BRV IgG工作浓度为5μg/mL,样品反应时间60 min,酶标抗体工作浓度为1: 5 000,以OD_(450)nm≥0.432作为阳性判定标准。该方法的板间、板内重复性变异系数小于10%,最低检测浓度为1.41μg/mL,并与牛呼吸道合胞体病毒(BRSV)、牛冠状病毒(BCV)和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)以及空肠弯曲杆菌(Campylobacter jejuni, Cj)、产肠毒素性大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)等病原无交叉反应。用建立的ELISA方法与BRV RT-PCR方法同时检测40份临床粪便样品,符合率达到95%。结果表明,建立的双抗体夹心ELISA方法具有较好的特异性和较高的敏感性,可用于BRV的快速检测。 本研究利用MA104细胞成功分离牛轮状病毒,并建立了双抗体夹心ELISA诊断方法,为牛轮状病毒诊断试剂盒的研制和深入开展病原学研究奠定了基础。
【学位授予单位】:黑龙江八一农垦大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S858.23

免费申请
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 倪亚炜;猪和牛轮状病毒的分离与鉴定[J];病毒学报;1986年01期
2 何孔旺,吴纪棠,林继煌,江杰元;用反向间接血凝试验快速检测轮状病毒抗原和抗体[J];病毒学报;1989年01期
3 李国华,钱渊,何湘君,霍云雯;A组轮状病毒我国地方株VP6基因的序列测定及其在杆状病毒系统中的表达[J];病毒学报;1999年03期
4 徐倏燊,王健伟,何雅青,姜慧英,洪涛;人轮状病毒NSP4基因变异与功能关系的初步研究[J];病毒学报;2002年02期
5 庞昕,柴家前,赵宏坤,姜仁辉;猪轮状病毒感染研究进展[J];动物医学进展;2000年04期
6 黄英;轮状病毒感染的免疫保护机制[J];国外医学.病毒学分册;1997年03期
7 温乐英;轮状病毒蛋白的研究进展[J];国外医学.病毒学分册;1996年03期
8 栾婧婧;杨少华;马广强;高运东;仲跻峰;赵宏坤;;新分离牛轮状病毒及其血清型的研究[J];家畜生态学报;2006年06期
9 高云航,孙泽威;猪轮状病毒病诊断技术综述[J];吉林农业大学学报;1999年S1期
10 倪艳秀,林继煌,何孔旺,江杰元;A组轮状病毒研究动态[J];江苏农业学报;1998年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 祁小乐;单克隆抗体双夹心ELISA检测伪狂犬病病毒的研究[D];河南农业大学;2004年
2 高会玲;双抗体夹心ELISA检测奶牛隐性乳房炎的研究[D];吉林农业大学;2007年
3 崔晓辰;A群轮状病毒单克隆抗体及免疫胶体金试纸条制备[D];东北农业大学;2008年
4 王洁清;牛轮状病毒RT-PCR检测和基于VP6重组抗原检测血清抗体ELISA方法初步建立[D];东北农业大学;2009年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 武军元;陈创夫;王智超;李有文;;融合蛋白VP4-STI的免疫效果观察[J];安徽农业科学;2007年21期
2 宋振辉;张鹦俊;;猪传染性胃肠炎病毒SC-Y株非编码区及结构蛋白的生物信息学分析[J];安徽农业科学;2008年22期
3 朱壮春;陈阳;郝东升;王艳茹;马玉妹;曹向可;穆艮艮;李金坤;史相国;;用低龄动物制备高效价Et免疫血清的探讨[J];安徽农业科学;2009年34期
4 王龙涛;葛晨霞;王翠瑜;高云航;胡桂学;;猪病毒性腹泻转基因植物疫苗研究进展[J];安徽农业科学;2010年29期
5 张德群,徐良玉,曾明华,蒋长苗,唐兆新,郭赞周,江杰元,何孔旺;淮北地区黄犊牛腹泻症的研究[J];安徽农学院学报;1989年03期
6 倪亚炜;猪和牛轮状病毒抗原和抗体的检测[J];病毒学报;1986年03期
7 谢金鑫;段招军;李丹地;李博文;兰蓓;李永清;孔翔宇;章青;李杰;;中国大庆奶牛中发现轮状病毒G10P[11][J];病毒学报;2010年05期
8 夏宝宣;杜美利;;纳米胶体金最佳标记条件的一种简易方法研究[J];标记免疫分析与临床;2010年01期
9 甘世伟;樊广文;胡运华;罗雄;;重组人α-2b干扰素治疗婴幼儿秋季腹泻98例临床观察[J];重庆医学;2008年02期
10 庞昕,柴家前,赵宏坤,姜仁辉;猪轮状病毒感染研究进展[J];动物医学进展;2000年04期
中国重要会议论文全文数据库 前5条
1 许啸晨;王元凤;刘纯西;魏新林;;抗2,4-D兔血清评价体系研究[A];管产学研助推食品安全重庆高峰论坛——2011年中国农业工程学会农产品加工及贮藏工程分会学术年会暨全国食品科学与工程博士生学术论坛论文集[C];2011年
2 牛建新;朱军;马兵钢;李海生;何梅;;梨树病毒cDNA探针检测技术研究[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
3 王志宇;王健伟;何深一;吴围屏;韩金祥;洪涛;;截短型A组轮状病毒VP6在E.coli中的高效表达[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
4 袁晓科;杨志强;李建喜;王学智;陈化琦;张艳;孟嘉仁;高杰;;重金属锅离子快速检测ELISA技术初步研究[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会成立大会暨第一次学术研讨会论文集[C];2008年
5 赵玉龙;焦玉兰;郁宏伟;马明;;胶体金免疫层析快速诊断试纸条研究进展[A];中国畜牧兽医学会生物制品学分会中国微生物学会兽医微生物学专业委员会2010年学术年会(第三届中国兽药大会学术论坛)论文集[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 袁峥嵘;金黄色葡萄球菌诱导奶牛实验性乳腺炎研究[D];中国农业科学院;2011年
2 刘霄卉;JSRV表面蛋白抗原表位的筛选及检测试剂盒的制备[D];内蒙古农业大学;2011年
3 迟春萍;人铜锌超氧化物歧化酶在毕赤酵母中高表达及其中试工艺研究[D];吉林农业大学;2011年
4 师东方;猪轮状病毒和传染性胃肠炎病毒核酸免疫的研究[D];东北农业大学;2002年
5 马兵钢;新疆库尔勒香梨主要病毒的分子检测研究[D];华南热带农业大学;2004年
6 董江丽;利用转基因苜蓿生产轮状病毒可食用疫苗研究[D];中国农业大学;2005年
7 牛建新;库尔勒香梨和葡萄病毒分子检测技术研究[D];沈阳农业大学;2004年
8 郭焱;重组人卵透明带蛋白3的表达及其在生殖免疫中作用的实验研究[D];吉林大学;2006年
9 李国华;杆状病毒系统中地方株轮状病毒蛋白的重组表达及病毒样颗粒的构建[D];中国协和医科大学;2001年
10 霍云雯;在昆虫细胞中表达轮状病毒我国地方株VP4并构建病毒样颗粒[D];中国协和医科大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 梁斌;一种能同时检测金黄色葡萄球菌A型和B型肠毒素单克隆抗体的制备及特性分析[D];华中农业大学;2010年
2 陆健康;抗玉米赤霉烯酮和抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇抗体的制备及性质分析[D];华中农业大学;2010年
3 曹晶;风疹病毒(RV)包膜糖蛋白E1特异基因片段的原核表达[D];南京医科大学;2009年
4 温志刚;抗树鼩IgG单抗制备与ELISA检测方法初步建立[D];昆明理工大学;2010年
5 张立静;TEM1型β-内酰胺酶免疫胶体金层析检测方法的建立[D];河北农业大学;2011年
6 杨晖泽;基于动态克隆选择的自适应免疫入侵检测器优化[D];太原理工大学;2011年
7 李纯;抗exendin-4单克隆抗体的制备及其ELISA检测方法的建立[D];吉林大学;2011年
8 邳志前;抗体类吸附剂的合成过程优化及性能评价[D];大连理工大学;2011年
9 张彩霞;雪卡毒素单克隆抗体的制备及鉴定[D];广东工业大学;2011年
10 查智辉;三疣梭子蟹血卵涡鞭虫单克隆抗体研制及其初步应用[D];浙江海洋学院;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王健伟,姜慧英,屈建国,赵同兴,洪涛;同时表达蓝舌病毒四个主要结构蛋白可装配成病毒样颗粒[J];病毒学报;2000年02期
2 何金生,王健伟,温乐英,徐倏焱木,屈建国,姜慧英,洪涛;用重组腺病毒表达A组轮状病毒主要中和抗原VP7可获得良好的免疫学效果[J];病毒学报;2001年02期
3 徐倏燊,王健伟,何雅青,姜慧英,洪涛;人轮状病毒NSP4基因变异与功能关系的初步研究[J];病毒学报;2002年02期
4 袁丽娟,钱渊,刘军,张又,熊朝晖,关德华,刘长清,邓琳菲,郭玉茹,谢若男,张振华,赵慧欣,王之梁;北京等我国四个地区婴幼儿腹泻轮状病毒VP4和VP7型别的研究[J];病毒学报;1994年02期
5 李国华,钱渊,熊朝晖,靖宇;北京地区G1-G4型人轮状病毒地方株VP7编码基因的序列分析[J];病毒学报;1998年02期
6 何湘君,钱渊,李国华,靖宇,刘军;在昆虫细胞中表达G2型轮状病毒地方株VP7基因[J];病毒学报;1998年04期
7 马丽丽,王玉金,杨书豪,李燕珠,郭瑶,白仲虎,杨艳艳,朱国珍,郑鹏举,王玉珠;快速乙肝表面抗原胶体金免疫层析测定法的建立及应用[J];标记免疫分析与临床;1997年04期
8 俞国乔,顾小根,赵灵燕,逄春泰;浙江省养猪场猪伪狂犬病野毒抗体检测[J];浙江畜牧兽医;2000年04期
9 鲍伟华,王维金;宁波市规模猪场伪狂犬病的监测及预防[J];浙江畜牧兽医;2001年01期
10 赵玮,廖国阳,蒋燕军,孙明波,张新文,姜述德;HCV结构蛋白在昆虫细胞中的表达及病毒样颗粒的形成[J];重庆医学;2003年10期
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 樊景凤;鸭肝炎病毒免疫种鸭抗体消长规律及其雏鸭母源抗体变化的研究[D];东北农业大学;2000年
2 苏小庚;河北省犊牛轮状病毒的分离鉴定及特性研究[D];河北农业大学;2005年
3 栾婧婧;犊牛轮状病毒的分离鉴定及快速诊断方法的建立[D];山东农业大学;2006年
4 钟涛;间接竞争ELISA检测TGEV方法的建立[D];东北农业大学;2006年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 彭克高;;猪羊轮状病毒的分离与鉴定[J];云南畜牧兽医;1990年01期
2 栾婧婧;杨少华;张维军;高运东;仲跻峰;赵宏坤;;半巢式RT-PCR快速检测犊牛轮状病毒方法的建立[J];中国人兽共患病学报;2006年07期
3 王丹;宋玲玲;王洪梅;杨宏军;武建明;高运东;仲跻峰;何洪彬;;反向遗传技术在牛轮状病毒研究中的应用[J];安徽农业科学;2011年12期
4 徐为燕;轮状病毒(综述)[J];畜牧与兽医;1980年02期
5 李成;Linda J.Saif;;应用免疫电镜技术检查猪传染性胃肠炎病毒和轮状病毒(下)[J];国外畜牧科技;1980年03期
6 粟寿初;陈文樾;;轮状病毒:病毒学和免疫学中的几个问题[J];家畜传染病;1980年02期
7 彭万强;轮状病毒感染症[J];中国兽医杂志;1981年01期
8 万新邦;庞其方;丘福禧;胥爱源;张胜泉;;人轮状病毒实验感染成年树鼩的研究(摘要)[J];医学研究通讯;1982年03期
9 王远萍;王伯钊;唐小佳;干德全;张君儒;吴炎兴;孙大锡;刘震;;乳猪感染人轮状病毒后小肠上皮细胞的超微结构变化[J];四川农业科技;1983年02期
10 李六金,夏咸柱,武德丽,贾补年,殷震 ,许基龙;犬轮状病毒的分离与鉴定[J];兽医大学学报;1984年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王斌;唐力;刘满清;彭劲松;涂君;杨继红;曾宪启;;武汉地区A组轮状病毒监测情况分析(2002~2003年)[A];生命科学与微生物专辑[C];2004年
2 栾婧婧;高运东;仲跻峰;赵宏坤;;半巢式RT-PCR快速检测犊牛轮状病毒方法的建立[A];第六届全国会员代表大学暨第11次学术研讨会论文集(下)[C];2005年
3 王培鑫;潘存娒;陈黎勤;;肠道腺病毒、轮状病毒、空肠弯曲菌的检测[A];2006(第三届)江浙沪儿科学术会议暨浙江省儿科学术年会论文汇编[C];2006年
4 胡秀华;;细胞培养与real-time RT-PCR相结合的方法检测水体中感染性轮状病毒[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
5 栾婧婧;高运东;仲跻峰;赵宏坤;;半巢式RT-PCR快速检测犊牛轮状病毒方法的建立[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会论文集[C];2005年
6 夏乐乐;何彪;杨凡力;徐琳;涂长春;;蝙蝠轮状病毒分离与鉴定[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第八届全国会员代表大会暨第十五次学术研讨会论文集[C];2013年
7 时洪艳;冯力;孙东波;;轮状病毒引起的仔猪腹泻[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
8 吴淑霞;李秀峰;席灵娟;;急性腹泻患儿粪便中A群轮状病毒的检测结果分析[A];第一届宁夏医学会检验学分会学术年会论文汇编[C];2005年
9 胡秀华;何苗;;定量测定轮状病毒滴度的几种方法的优化及细胞系的选择[A];中医药生物化学与分子生物学通讯[C];2008年
10 王斌;孙红;朱军生;;PAGE法与胶体金法检测儿童腹泻轮状病毒研究[A];湖北省微生物学会第十届理事会分析微生物专业委员会第四次学术会议论文汇编[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 王文斗;轮状病毒秋冬爱找婴幼儿[N];南方日报;2004年
2 冯立中;抗人轮状病毒牛丙球蛋白研制成功[N];健康报;2008年
3 中国医科大学盛京医院小儿消化科教授 孙梅 整理 阎红;轮状病毒盯上宝宝[N];健康报;2008年
4 通讯员 杨光礼 记者 武娜;轮状病毒引发小儿腹泻增多[N];连云港日报;2008年
5 文 都;小儿秋季腹泻原是轮状病毒作怪[N];中国中医药报;2004年
6 徐磊;第二届国际轮状病毒研讨会在京召开[N];中国医药报;2005年
7 记者 胡蔓 见习记者 严运涛;武汉市疾控中心发现人A、B组轮状病毒混合感染[N];湖北日报;2004年
8 本报记者 郭静 实习生 贾亚敏 王诗霖 通讯员 肖金;严把“入口关”防秋季小儿腹泻[N];广东科技报;2008年
9 ;轮状病毒并不可怕[N];山西日报;2003年
10 文文;严把婴幼儿“入口”卫生关[N];广东科技报;2008年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 曾玫;上海地区儿童腹泻轮状病毒感染的临床流行病学研究[D];复旦大学;2003年
2 李国华;杆状病毒系统中地方株轮状病毒蛋白的重组表达及病毒样颗粒的构建[D];中国协和医科大学;2001年
3 张二芹;猪A组轮状病毒VP6基因转植物的研究[D];吉林农业大学;2006年
4 魏静;人源轮状病毒T细胞识别及其小型猪腹泻模型的建立[D];第三军医大学;2006年
5 薛斌;氯和二氧化氯对人轮状病毒的消毒规律及基因组损伤作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2013年
6 王敏;基因优化的表达人轮状病毒重组腺病毒免疫效果研究[D];中国疾病预防控制中心;2008年
7 张静;轮状病毒分子流行病学调查及脂质体DNA疫苗研究[D];重庆医科大学;2002年
8 秦岚;轮状病毒NSP1抑制天然免疫机制及其对宿主蛋白调控的研究[D];北京协和医学院;2010年
9 李晋涛;人源轮状病毒的转基因马铃薯口服疫苗研究[D];第三军医大学;2003年
10 刘勇;轮状病毒VP7基因修饰、表达及免疫原性研究[D];中国协和医科大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张德友;北京地区水环境中轮状病毒的分布规律及其健康风险评价[D];北京林业大学;2009年
2 李廷栋;轮状病毒结构蛋白在大肠杆菌中的表达及其类病毒颗粒的体外组装[D];厦门大学;2009年
3 廖炀;重庆地区婴幼儿轮状病毒临床及分子流行病学特征研究[D];重庆医科大学;2010年
4 张喆;成人腹泻粪便样品中A组轮状病毒全基因分析[D];华中师范大学;2011年
5 兰蓓;太原地区五岁以下腹泻住院儿童轮状病毒的分子流行病学研究[D];山西医科大学;2010年
6 黄晓磊;轮状病毒病毒血症与肠道外脏器损害的研究[D];浙江大学;2005年
7 栾婧婧;犊牛轮状病毒的分离鉴定及快速诊断方法的建立[D];山东农业大学;2006年
8 赵亚玲;2002年100例秋冬季腹泻患儿轮状病毒分子流行特征的研究[D];昆明医学院;2003年
9 王艳丽;2006年秋冬季腹泻患儿轮状病毒基因型研究[D];昆明医学院;2008年
10 白萱;反向遗传构建A组轮状病毒重配毒株的研究[D];华中师范大学;2008年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026