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《黑龙江八一农垦大学》 2012年
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HRV间接ELISA检测方法的建立及大庆市区腹泻患儿HRV感染率的调查

文程  
【摘要】:轮状病毒(Rotaviruses,RV)是引起人类和动物急性胃肠道传染病的主要病原体。它主要感染小肠上皮细胞,从而造成细胞损伤,引起腹泻,严重可导致脱水,进而引起水和电解质失衡而危及生命。轮状病毒广泛存在于自然界中,可感染各类人群,尤以A群轮状病毒最为常见。由轮状病毒感染所引起的婴幼儿腹泻是世界上导致婴幼儿急诊和死亡的第二大疾病,我国婴幼儿腹泻中40%~60%是因感染轮状病毒所致。此外,轮状病毒对幼龄动物也产生巨大的影响,给畜牧业带来巨大的损失。由于目前尚无治疗轮状病毒的特效药物,因此建立方便、快速、灵敏的检测方法,随时监控轮状病毒感染的情况,对控制其感染的大规模流行的发生尤为重要。 本试验将来源于儿童腹泻患者的粪便样本20例,进行轮状病毒阳性检测,并对检测为阳性的粪样处理后,接种于MA104细胞,进行细胞培养并传代,第6代出现明显的CPE变化,获得一株病毒,通过中和试验和RT-PCR及序列分析,鉴定该分离的毒株为人源轮状病毒(HRV)。然后,运用差速离心法浓缩纯化该HRV,以纯化的HRV作为包被抗原,建立了间接ELISA方法,优化并确定了该方法的各种最佳条件为:HRV最佳包被液为50mM pH9.6碳酸盐(CBS)缓冲液,抗原最适包被浓度为10.0μg/mL,最佳包被条件为4℃12h;最佳封闭液及适用浓度为3%的明胶,封闭时间为37℃1h;最佳血清稀释液为5%脱脂乳,最适稀释度为1:200,最佳作用时间为37℃30min;酶标二抗的最适工作浓度为1:10000,最佳作用时间为37℃1h;最佳底物显色液及终止液分别为TMB和1%SDS,底物最佳显色时间37℃10min。通过敏感性试验、交叉性试验、重复性试验及符合性试验对该方法的敏感性、特异性、重复性进行了评测,结果显示本试验所建立的间接ELISA方法敏感度高,特异性强,具有较好的重复性,与病毒中和试验和轮状病毒诊断试剂盒的HRV检出率的总符合率分别为94%和92%。 应用本试验所建立的间接ELISA诊断方法对2011年7月~2012年3月期间大庆市区内儿童腹泻患者中HRV的感染情况进行初步的流行病学调查。结果显示,该期间大庆市区内的儿童腹泻患者中, HRV的阳性感染率平均为39.9%。通过对不同季节、不同年龄、不同区域等条件下HRV感染率的对比分析,结果表明HRV的感染与季节、年龄、生活环境等因素有一定的相关性。
【学位授予单位】:黑龙江八一农垦大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R725.1

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