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《黑龙江八一农垦大学》 2014年
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牛呼吸系统疾病综合征PCR方法建立及初步应用

王嵩  
【摘要】:牛呼吸道合胞体病毒(Bovine respiratory syncytial virus,BRSV),牛传染性鼻气管炎病毒(Infections bovine rhinotracheitis virus,IBRV)牛副流感病毒3型(Bovine parainfluenza virus3,BPIV-3)均是主要的原发性呼吸系统疾病病原体,均会引起牛呼吸系统疾病综合征(Bovine respiratory disease complex, BRDC),且常呈混合感染。BRDC是十分常见的,并具有很高的感染率和死亡率,是困扰养牛业的世界性难题。BRDC被美国全国牛场主协会等组织认为是养牛业的头等大病,被欧洲称为三大牛病之一。在我国该病的感染率和发病率也在不断上升,对养牛业造成了严重的经济损失。 本研究根据GenBank上发表的牛呼吸道合胞体病毒BRSV核衣壳蛋白N基因序列,牛传染性鼻气管炎病毒IBRV保守基因gB序列和牛副流感病毒3型BPIV-3核衣壳蛋白N基因序列,设计并合成3对特异性引物。优化三重PCR反应条件,建立了3种病毒的三重PCR方法,可同时扩增出BRSV HJ株596bp,IBRV DQ株398bp和BPIV-3DQ株704bp大小的特异性片段,而对牛腺病毒7型、牛无浆体和Vero正常细胞扩增结果均为阴性。该三重PCR技术能检出BRSV的敏感性可达10TCID50·100μL-1, IBRV的敏感性可达10-1TCIDso·100μL-1和BPIV-3的敏感性可达102TCID50·100μL-1.用建立的BRSV, IBRV和BPIV-3三重PCR检测方法,BRSV和BPIV-3双重PCR检测方法,BRSV单重PCR检测方法,IBRV单重PCR检测方法,BPIV-3单重PCR检测方法和病毒分离鉴定方法对临床上的7份病料进行。结果显示,三重PCR方法,双重PCR方法和单重PCR方法检测结果符合率为100%;病毒分离鉴定方法阳性检出率较低。表明建立的关于牛呼吸系统疾病综合征的PCR检测方法有一定临床应用价值,可用于对3种病毒的同时检测和鉴别诊断。
【学位授予单位】:黑龙江八一农垦大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:S858.23

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【参考文献】
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