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《黑龙江八一农垦大学》 2017年
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猪伪狂犬病病毒HeN1株gE蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

吴桐  
【摘要】:伪狂犬病(Pseudorabies,PR),是由伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)所引起的多种家畜、野生动物感染的一种急性传染病。PRV属于疱疹病毒科(Herpesviridae),α-疱疹病毒亚科(Alphaherpesvirinae),猪疱疹病毒Ι型(Suid herpesΙ)。gE基因是PRV的一个与毒力相关的增殖非必需基因,gE基因编码的糖蛋白E(gE)是非必需糖蛋白,缺失gE基因并不影响病毒粒子的复制、扩增以及免疫原性,但病毒粒子的毒力却大幅减弱,因此,gE糖蛋白可以作为区分疫苗免疫猪和野毒感染猪的标志蛋白。2011年以来,PR在我国猪场中呈暴发性流行,给我国养猪业造成了严重的经济损失,所以,建立快速有效的诊断检测方法势在必行。本研究以原核系统表达PRV HeN1株截短的gE(aa127~aa232)蛋白(rgE),并对表达的rgE进行纯化免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,以该病毒感染的Vero E6细胞及真核表达的gE蛋白为检测抗原,采用IFA检测方法筛选杂交瘤细胞系,获得一株稳定分泌抗PRV gE的MAb杂交瘤细胞系,将其命名为mgE185,并通过截短表达gE蛋白鉴定该MAb的抗原表位。mgE185 MAb亚型鉴定为IgG1型,轻链为Κ链。该MAb不具有中和病毒的活性,其细胞培养上清及腹水IFA效价分别为1:80和1:2 560。Western blot试验显示mgE185可以特异性识别gE蛋白,表明其针对的抗原表位为线性表位。通过截短表达gE蛋白鉴定该MAb的抗原识别序列为151IGDYL155,序列比对表明该抗原表位在PRV中高度保守且是首次发现,在以往的文献中未见报道。该序列与Jacobs鉴定的主要抗原表位区aa52~aa238相比更加短小、精确。综上所述,本研究制备的mgE185 MAb以及其抗原表位的确定为进一步研究PRV gE的抗原结构奠定了基础,为PR的诊断治疗以及疫苗的研制提供了理论与实践依据。
【学位授予单位】:黑龙江八一农垦大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.651

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