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籽鹅垂体组织全长cDNA文库的构建及部分克隆序列分析

邓效禹  
【摘要】: 为深入研究籽鹅垂体调控生殖生理的分子机理,以籽鹅垂体组织为试验材料,用SMART(switching mechanism at 5′end of RNA transcript)方法构建了籽鹅垂体组织的全长cDNA文库。随机挑取11个噬菌斑,用载体克隆位点两端的通用引物进行扩增,以检测所构建的文库的质量。将文库的λTriplEx2噬菌体载体转化到pTriplEx2质粒载体,随机挑取217个克隆,用T7和SP6通用引物进行PCR鉴定,并选取不同长度的基因143个测序。取得结果如下: 1.利用λTriplEx2噬菌体构建了籽鹅垂体组织cDNA文库,并对文库质量进行鉴定结果显示,该文库的初始滴度为6×105 pfu/mL,重组率为94%,插入片段长度范围为0.5~2.0 kb。结果表明,成功构建了籽鹅垂体组织cDNA文库。 2.选取不同长度143个克隆测序,完成测序140个,去掉冗余序列后共有108个序列,unigene比率为87%。测定的cDNA序列与BLASTn进行比较,其中73个与鸡具有较高的同源性,可认定为已知序列EST,其中1个与大雁的催乳素基因的相似性高达99%;1个与大雁的生长激素基因的相似性高达100%,还有1个与原鸡的铁蛋白重链基因的相似性达到90%。获得35个未注册基因。本研究为进一步从分子水平探讨籽鹅垂体调控生殖生理的分子机理奠定了基础。


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