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《东北农业大学》 2011年
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花粉管通道法介导aiiA和TuMV-CP基因转化大白菜的研究

韩丽伟  
【摘要】:大白菜(Brassica campestris L. ssp. pekinensis)原产于中国,是我国蔬菜栽培中分布最广,种植面积最大的蔬菜作物之一,在我国尤其是北方地区的“菜篮子工程”中占有举足轻重的地位。但是,近年来随着大白菜栽培面积的不断扩大和种植年限的不断增加,软腐病、病毒病等许多病害有加重发展的趋势,严重地影响了大白菜的生产。本研究通过花粉管通道法将aiiA,TuMV-CP基因导入大白菜,期望获得抗病转基因植株,为大白菜的抗病育种奠定理论基础。研究结果如下: 1.根据aiiA基因的已知序列,克隆该基因,以植物表达载体pBBBast+为目标载体,通过酶切、连接、筛选、鉴定等操作构建了植物表达载体pBBBast-aiiA。 2.本研究利用pET-29a构建了pET29a-aiiA原核表达载体,制备了E.coli BL21(DE3)-pET29a-aiiA工程菌。通过对融合表达条件(如温度、IPTG浓度及诱导时间)进行优化并用SDS-PAGE检测,结果表明,在20℃低温,0.8 mmol/L IPTG诱导表达25 h条件下可获得含量最高的可溶性AiiA蛋白51.1μg/mL。 3.纯化后的AiiA蛋白和破壁上清液经活性检测和抑菌抗病实验,结果表明均具有良好的AiiA活性和良好抑菌效果。 4.通过花粉管通道法,将aiiA,TuMV-CP基因转入大白菜“二牛心”品种中。对转基因植株进行PCR和PCR-Southern验证,获得了转aiiA基因大白菜5株,转化率为0.0242%;转TuMV-CP基因大白菜29株,转化率为0.1531%。
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:S634.1

【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 张言朝;葛宇;于杨;徐文龙;白玉娇;崔崇士;屈淑平;;南瓜子房注射法遗传转化的研究[J];中国蔬菜;2012年16期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前3条
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中国硕士学位论文全文数据库 前8条
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【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国重要会议论文全文数据库 前10条
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9 严继勇;何玉科;曹家树;;一种新的植物基因转化方法——花蕾微量注射法[A];全国蔬菜遗传育种学术讨论会论文集[C];2002年
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中国博士学位论文全文数据库 前10条
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9 郑红英;TuMV HC-Pro蛋白自身互作及其与拟南芥编码Rieske Fe/S蛋白的互作研究[D];华中农业大学;2011年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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9 沈玮玮;菰抗病候选基因筛选及其转基因水稻白叶枯病抗性分析[D];江西师范大学;2010年
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【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前6条
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3 徐恒戬;利用真空渗入法获得转基因抗虫白菜及其转化机理的研究[D];山东农业大学;2004年
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中国硕士学位论文全文数据库 前10条
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【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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中国博士学位论文全文数据库 前3条
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2 庄木;我国几种蔬菜部分CMV分离物2b基因的分离及其功能分析[D];中国农业科学院;2003年
3 李杰;几种名贵洋兰转基因受体系统的建立及遗传转化[D];南京林业大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
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3 贾庆利;外源基因在拟南芥转基因植株中的遗传研究[D];西北农林科技大学;2004年
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【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
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2 张晓伟;原玉香;王晓武;孙日飞;武剑;谢从华;蒋武生;姚秋菊;;大白菜DH群体TuMV抗性的QTL定位与分析[J];园艺学报;2009年05期
3 苏学军;多抗高产大白菜新品种秋冠[J];中国农村科技;1998年07期
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7 王景义,梁惠芳,任建萍,冯新茹,杨丽薇;中白1号大白菜的选育[J];中国蔬菜;1994年03期
8 司朝光,王媛,杨梁,李吉奎;高产、抗病、优质大白菜新品种青研四号[J];蔬菜;2004年05期
9 王景义,梁惠芳,任建平,冯新茹,杨丽薇;两个优良的大白菜种质材料[J];中国蔬菜;1993年01期
10 蔡丽,许泽永,陈坤荣,候明生;芜菁花叶病毒研究进展[J];湖北植保;2004年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
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3 闫春芳;;地膜鲜黏玉米复种大白菜技术[A];第四届全国鲜食玉米暨速冻果蔬大会专集[C];2008年
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5 刘庆丰;熊国如;王志远;吴兴兴;毛自朝;何月秋;;枯草芽孢杆菌XF-1在大白菜根际定殖能力研究[A];中国植物病理学会2009年学术年会论文集[C];2009年
6 闻晓英;刘立平;顾爱侠;王彦华;何洪巨;申书兴;;添加甘蓝基因的大白菜优良新种质的获得[A];中国园艺学会2011年学术年会论文摘要集[C];2011年
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10 何玉科;余旭红;彭洁松;冯献忠;郑志仁;杨素欣;沈瑞娟;刘平林;;大白菜包叶形态发生的基因调控[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展(下册)[C];1999年
中国重要报纸全文数据库 前10条
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5 本报记者 李竞立 刘云;安宁农民种出“巨型”大白菜[N];云南日报;2007年
6 本报记者 刘丽娜;胶州大白菜品牌成就规模[N];青岛日报;2009年
7 李荣云;大白菜贮藏措施[N];中国特产报;2004年
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9 魏雅华;评“卖彩电不如卖大白菜”[N];中国信息报;2003年
10 记者张悦;货源紧俏 今秋大白菜价格有点高[N];新农村商报;2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
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10 张慧;大白菜细胞核雄性不育基因的分子标记及定位[D];中国农业科学院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 韩丽伟;花粉管通道法介导aiiA和TuMV-CP基因转化大白菜的研究[D];东北农业大学;2011年
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3 韩和平;大白菜抗芜菁花叶病毒病基因的AFLP分子标记的研究[D];中国农业科学院;2003年
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6 王志和;大白菜亲本耐热性筛选方法的研究[D];山东农业大学;2005年
7 潘凯;大白菜花芽分化和抽薹过程的光温诱导效应及其机理研究[D];东北农业大学;2000年
8 屈淑萍;大白菜品质性状综合评价及配合力研究[D];东北农业大学;2000年
9 熊玉兰;橘红心白菜和普通大白菜类胡萝卜素代谢途径主要酶基因的表达分析[D];首都师范大学;2002年
10 吕建华;夏播大白菜未熟抽薹原因研究[D];河南农业大学;2001年
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