收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

牛卵母细胞体外受精及热应激条件下IGF-I对其影响的研究

亓美玉  
【摘要】:随着胚胎工程技术的深入研究,牛卵母细胞体外受精技术的应用范围已越来越广泛,不仅为牛胚胎移植技术的商业化发展提供了更为廉价的胚胎来源,更为研究动物生殖机能、生殖细胞的体内发育机制以及解决现实生产中的外界应激因素对动物生殖机能的影响机制搭建了技术平台。热应激(heat stress)是世界范围内普遍存在的、对奶牛生殖力影响较大的环境因素,而IGF-I对胚胎早期发育则具有显著的促进作用,但IGF-I在牛卵母细胞体外成熟阶段的影响作用仍不明确。本研究首先对卵母细胞的体外成熟、体外受精及体外培养过程中的一些影响因素进行了科学实验,并利用成熟的牛卵母细胞体外受精技术对热应激(heat shock,HS)影响卵母细胞发育能力进行了细胞及分子水平的研究,并对引起人们广泛关注的IGF-I在卵母细胞体外成熟前后对卵母细胞发育能力的影响进行了多个组合的对比研究。主要研究结果如下: 实验一、正常体温条件下牛卵母细胞体外成熟、受精及早期胚胎体外培养技术研究 1)牛卵母细胞体外成熟因素研究 屠宰场获取卵巢后的卵巢离体保存时间在6h以内时对卵母细胞的体外成熟率无影响,超过6h后成熟率下降;获卵卵泡直径在2mm以内时卵母细胞的体外成熟率较低(51.66±3.15),直径大于2mm后,尽管成熟率随卵泡直径的增加而呈增加趋势,但卵泡直径在2-6mmm,7-8mmm及9-10mmm时的卵母细胞成熟率间并无显著差异(80.73±2.81,84.32±1.85,87.27±6.23,P0.05);A、B级COCs的卵母细胞成熟率较高(85.92±3.35 vs 82.47±3.24,P0.05),C级COCs的成熟率显著下将(60.26±5.46,P0.05),D级COCs的成熟率最低(18.23±4.15,P0.05)。 2)牛卵母细胞体外受精因素研究 卵泡直径对卵母细胞体外受精后的卵裂率有较大影响,随卵泡直径增加而显著增加(P0.05)。卵泡直径对囊胚率也有一定影响,当直径小于2mm时囊胚率仅为6.37±2.58,直径在2-8mmm之间时囊胚率显著增加(24.73±1.63,28.21±1.89,P0.05),直径在9-10mm的囊胚率显著高于除7-8mm外的其它各组(31.43±7.49,P0.05);体外受精前卵丘细胞完全保留或部分保留对卵裂率及囊胚率均无影响,但完全脱除卵丘细胞使卵裂率及囊胚率显著降低;精卵共孵育时间在8-18h之间的各时间段间对卵母细胞的发育能力无影响。 3)牛早期胚胎体外培养因素研究 每24h或48h对胚胎培养液进行半量更换对卵裂率及囊胚率的影响并不显著,与对照组的结果无差异,但在胚胎培养的第3天补充10%的FCS对囊胚的发育具有促进作用。 实验二、热应激(HS)条件下IGF-I对牛卵母细胞体外发育能力的影响研究 1)GV期牛卵母细胞在热应激条件下添加IGF-I对其发育能力的影响 HS条件及IGF-I对IVM后卵母细胞胞质内皮质颗粒的分布、核成熟及核凋亡均未产生任何影响。 2)热应激条件下牛卵母细胞体外成熟时IGF-I的添加对其发育能力的影响 HS显著降低了IVF后的卵裂率(CvsHS为75.60±3.54 vs 56.55±5.24,P0.05),并降低了IVF后42h时超过2-细胞胚胎的比率(CvsHS为39.11±5.17 vs 22.66±4.99,P0.05)。但IGF-I仅使LCR组中2-细胞胚胎与所有超过2-细胞的胚胎间的比率有降低趋势(3.42±0.53%vs 1.8±0.53%;P0.1);HS及IGF-I对IVM后胞质内皮质颗粒的分布未产生任何影响:HS显著增加了处于MⅠ期卵母细胞的比率(C vsHS为1.75±1.75 vs 39.34±5.39,P0.05),同时降低了MⅡ期卵母细胞的比率(C vsHS为57.9±13.27 vs 13.91±4.16,P0.05)。HS组中处于晚期核成熟阶段(Telo I及MⅡ)的卵母细胞比率显著低于C组(P0.01), IGF-I在热应激条件下轻微增加了处于晚期核成熟卵母细胞的比率,但差异并不显著(P0.05);C组中TUNEL阳性卵母细胞的比率低于HS组(27.98±5.95 vs 47.944±14.24;P≤0.09),在热应激条件下,IGF-I的添加使TUNEL阳性卵母细胞的比率降至对照组水平,但并无显著差异。热应激及IGF-I对4-细胞期胚胎中GAPDH及GDF9的表达水平无显著影响。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 C.L.Keefer;陶涛;;辅助受精的显微技术[J];中国畜牧兽医;1990年05期
2 万敏;马夜肥;王勇胜;彭新容;张东;杨鹭;张涌;;脱羰秋水仙碱诱导牛卵母细胞显核[J];农业生物技术学报;2008年04期
3 孙青原,秦鹏春;牛卵母细胞发育的超微结构研究[J];山东农业大学学报(自然科学版);1989年04期
4 文国艺,卢克焕;受精液中肝素和咖啡因的组合对牛卵母细胞体外受精的影响[J];广西农业生物科学;1994年01期
5 王志伟;胡勇策;马晓玲;刘文强;殷吉庆;云彦;雷安民;;牛去核卵母细胞能够被孤雌激活并发育到桑椹胚[J];农业生物技术学报;2010年01期
6 Е.В.Ярных ,张富川;牛卵母细胞的孵育和卵细胞的体外受精[J];草食家畜;1985年02期
7 J.M.OCANAQUERO,孙凤俊,孙桂云;牛羊水对牛卵母细胞体外成熟的影响[J];养殖技术顾问;1997年03期
8 李绍龙,张桂春,何剑斌;影响牛卵母细胞孤雌激活胚胎发育的因素[J];黄牛杂志;2004年05期
9 戴玲;江胜芳;胡冬玲;张昌军;;人卵泡液对牛未成熟卵母细胞体外培养的影响[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2008年05期
10 吕丽华;李富忠;岳文斌;;成熟液中添加不同浓度雌二醇对山羊卵母细胞成熟的影响[J];黑龙江畜牧兽医;2008年12期
11 彭礼繁;;促性腺激素在哺乳动物卵母细胞成熟中的作用机制[J];当代畜禽养殖业;2010年01期
12 李公远;;畜牧业胚胎学的成就及运用[J];四川草原;1991年04期
13 蒋和生,卢克焕;生长因子对牛卵母细胞体外成熟、体外受精及其体外发育的影响[J];草食家畜;1992年S1期
14 韦精卫;韦英明;孟凡丽;杨素芳;石德顺;;激素及生长因子对牛卵母细胞体外成熟的影响[J];广西畜牧兽医;2006年05期
15 易康乐;李纯锦;陈露;孙燕玲;燕海峰;刘莹莹;石德顺;周虚;;不同保存方法对牛卵母细胞总RNA和cDNA品质的影响[J];家畜生态学报;2011年03期
16 孙青原;秦鹏春;;牛卵母细胞发育过程的细胞核变化[J];东北农业大学学报;1990年03期
17 谭世俭,卢克焕;牛卵母细胞体外成熟培养时间对体外受精及早期胚胎体外发育的影响[J];草食家畜;1992年S1期
18 Takayuki Sakurada;陈晓武;;牛卵母细胞体外受精研究中运送卵巢时的温度和培养基PH的影响[J];湖北畜牧兽医;1993年04期
19 谭世俭,卢克焕;受精用液种类对牛卵母细胞体外受精的影响[J];中国兽医学报;1994年02期
20 陈鸿冰,卢克焕;蛋白质添加剂对牛卵母细胞体外成熟、体外受精及早期胚胎体外发育的影响[J];广西农业生物科学;1994年01期
中国重要会议论文全文数据库 前8条
1 卞江涛;倪明;胡高博;赵鑫;吕自力;卢全晟;薛利;宋彦军;张冰;张居农;;不同冷冻方法对牛卵母细胞及孤雌胚发育的影响[A];中国畜牧兽医学会动物繁殖学分会第十五届学术研讨会论文集(上册)[C];2010年
2 雷安民;杨春荣;高志敏;窦忠英;;牛卵母细胞体外成熟的研究[A];中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集[C];2001年
3 雷安民;敬晓棋;严兴荣;胥涛;窦忠英;;牛卵母细胞体外成熟部分影响因素的研究[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
4 赵红卫;李青旺;陈学进;胡建宏;江中良;王立强;韩增胜;;HA对牛早期胚胎无血清培养影响的研究[A];全国首届动物生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
5 卞江涛;倪明;胡高博;赵鑫;吕自力;卢全晟;薛利;宋彦军;王国旗;张冰;张居农;;不同冷冻方法对牛卵母细胞及孤雌胚发育的影响[A];《2009中国牛业进展》论文集[C];2009年
6 朱淑文;吉泽绿;今野博章;李培昌;;不同培养基对牛卵泡内罗丹母细胞体外成熟的影响[A];动物学专辑——上海市动物学会2001年年会论文集[C];2001年
7 滕维中;石德顺;吴文周;曲华;安美文;;动物卵母细胞透明带弹性系数的一种测定方法[A];第七届全国生物力学学术会议论文集[C];2003年
8 郭宪;阎萍;梁春年;包鹏甲;曾玉峰;;生物技术在牦牛繁育中的应用[A];2010中国牛业进展[C];2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王振飞;牛卵母细胞抽提物对人肺癌细胞的表观遗传重编程作用研究[D];内蒙古大学;2013年
2 华松;体细胞核移植及线粒体命运的研究[D];西北农林科技大学;2007年
3 李向臣;牛卵母细胞去核方法及体细胞核移植的研究[D];西北农林科技大学;2007年
4 易康乐;Figla和BDNF对猪和牛卵母细胞及早期胚胎生长发育的影响[D];吉林大学;2008年
5 张学明;人gdnf在牛胎儿成纤维细胞β-casein基因座的定位整合及基因打靶克隆囊胚的制备[D];内蒙古大学;2009年
6 李雪峰;牛卵母细胞孤雌激活与体细胞核移植[D];西北农林科技大学;2001年
7 彭新荣;提高牛体细胞核移植效率的研究[D];西北农林科技大学;2008年
8 江明生;应用活体采卵—体外受精技术生产牛性控胚胎的研究[D];广西大学;2008年
9 李守军;热休克对牛卵母细胞和IVP胚胎影响的研究[D];东北农业大学;2001年
10 桑国俊;牛卵母细胞及体外胚培养技术研究[D];甘肃农业大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李国浩;牛卵母细胞冷冻方法的研究[D];河南科技大学;2011年
2 史芸安;ARF1在牛卵母细胞第一次减数分裂中的作用研究[D];西北农林科技大学;2012年
3 李红义;玻璃化冷冻体外成熟牛卵母细胞的研究[D];内蒙古大学;2004年
4 井勇;Cdh1基因在牛卵母细胞GVBD中的功能研究[D];西北农林科技大学;2012年
5 杨文琳;CDC20对体外培养的牛卵母细胞第一极体排出和卵裂影响的研究[D];西北农林科技大学;2012年
6 蔡春花;牛卵母细胞的体外成熟以及活性化处理对孤雌发育的影响[D];延边大学;2002年
7 任久生;化学辅助去核方法对牛卵母细胞MAPK活性及母源基因c-mos表达水平的影响[D];吉林大学;2013年
8 乌云其其格;卵母细胞孤雌激活诱导的孤雌胚Ca~(2+)分布变化和EGFR的表达[D];内蒙古农业大学;2008年
9 韩雪花;影响牛卵母细胞体外受精及胚胎发育的几种因素的研究[D];延边大学;2002年
10 王珂;奶牛卵母细胞玻璃化冷冻方法及胚胎程序化冷冻研究[D];甘肃农业大学;2008年
中国重要报纸全文数据库 前4条
1 记者 刘伟霖;黑龙江试管牛诞生[N];农民日报;2008年
2 于金枝;繁殖牛羊成本低 效益显著[N];农民日报;2003年
3 唐立新记者 李丽云;东三省首批试管牛在哈诞生[N];科技日报;2008年
4 本报特约撰稿人 陆志城 瑶薰;克隆人又要“来”了[N];医药经济报;2003年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978