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《东北农业大学》 2014年
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黄连及其单体对S.suis生物被膜luxS基因及毒力因子的影响

刘冰  
【摘要】:猪链球菌是引起猪包括脑膜炎、败血症、心内膜炎、关节炎、肺炎等威胁生命疾病的重要病原。根据荚膜多糖抗原的不同,猪链球菌分为35个血清型(1-34,1/2),其中猪链球菌2型是最常见、毒力最强的血清型菌株。目前国内外学者认为,猪链球菌在动物体内外可以形成生物被膜(biofilm,BF),生物被膜作为细菌的一种重要生存方式,受多种因素的影响和调节。其中,群体密度感应(quorum sensing,QS)现象就是近年来发现的对生物被膜产生重要作用的影响因素之一。QS即细菌通过自身产生的信号分子进行交流和协调群体行为的过程,与QS现象有关的种间QS信号系统由luxS基因编码的AI-2信号分子介导完成。LuxS/AI-2不仅影响猪链球菌生物被膜的形成,而且影响细菌毒力因子的表达。干预猪链球菌的QS系统有可能成为未来研发抗微生物药物的重要策略。 本试验通过建立猪链球菌体外生物被膜模型,应用结晶紫染色、菌落计数、扫描电镜等方法研究黄连水提物及单体盐酸小檗碱、盐酸巴马汀和盐酸药根碱对生物被膜形成的干预作用。结果表明亚MIC的盐酸小檗碱与阴性对照组相比差异有统计学意义(P0.01),黄连水提物、盐酸巴马汀在亚MIC浓度下亦可降低生物被膜的生成量(P0.05),有效地抑制猪链球菌生物被膜的形成。 采用Real-time PCR方法检测黄连水提物及单体在亚MIC浓度对信号分子LuxS/AI-2蛋白RNA及cps、sly、gapdh、gdh、ef、mrp、fbps毒力基因mRNA表达水平的影响,以揭示黄连水提物及单体干预下LuxS/AI-2和毒力因子的关系。结果显示:与生物被膜对照组相比,黄连水提物、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀及盐酸药根碱对LuxS/AI-2蛋白的mRNA表达量分别下调2.44、4.35、4.00和1.41倍(P0.05)。黄连水提物组sly、gapdh、fbps基因mRNA表达量分别下调4.35、1.54和1.75倍(P0.05),cps、gdh、mrp基因表达分别上调1.79、1.72和1.28倍(P0.05);盐酸小檗碱组与生物被膜对照组相比,sly、gapdh、ef基因mRNA表达量分别下调3.13、3.85和2.33倍(P0.05),cps、gdh、mrp基因表达分别上调1.54、1.55和1.71倍(P0.05);盐酸巴马汀组apdh、ef、fbps基因mRNA表达量分别下调1.89、2.13和1.89倍(P0.05),cps、gdh基因表达分别上调1.53和2.15倍(P0.05);盐酸药根碱组ef、gapdh基因mRNA表达量分别下调1.82和1.92倍(P0.05),cps、mrp、gdh基因表达分别上调1.69、1.18和1.87倍(P0.05)。结果表明黄连水提物及单体对猪链球菌生物被膜毒力基因有调节作用。 综上所述,黄连水提物及单体干预猪链球菌生物被膜形成,且对猪链球菌luxS蛋白和毒力基因有调节作用。
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:S852.61

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【参考文献】
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