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《东北农业大学》 2017年
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芦丁干预猪链球菌生物被膜形成对荚膜多糖含量和结构的影响

王畅  
【摘要】:2型猪链球菌(Streptococcus suis,S.suis)是一种重要的人兽共患病病原菌,形成生物被膜(biofilm,BF)后,细菌群体耐药性极强,在感染处难以全部清除,致使感染迁延不愈,因此,怎样抑制生物被膜形成以及减少生物被膜感染是兽医临床急需解决的难题,已成为海内外研究人员关注的重点。2型猪链球菌生物被膜的形成过程非常复杂,其经过黏附、聚集、成熟、脱落后再次循环的过程,在细菌经过24 h培养后完成黏附过程,在60~72h生物被膜成熟。黏附是生物被膜形成的第一步骤,并且是干预生物被膜的形成及减少生物被膜感染的关键环节。荚膜多糖作为2型猪链球菌的毒力因子,不但有抗吞噬、黏附和定植的作用,还可以调控黏附影响猪链球菌生物被膜的形成。当荚膜多糖的含量下降时,促进了生物被膜的形成,但其结构改变对生物被膜影响尚不清楚。芦丁(rutin)是黄酮类化合物,在自然界中普遍存在,具有多方面的生物活性,价廉易得。而且本实验室前期发现丁香叶水提物对猪链球菌生物被膜具有很好的干预作用。通过灰色关联度和谱效关系分析,确定丁香叶中发挥作用的主要活性成分为芦丁,但其对荚膜多糖含量和结构的影响尚不清楚。故本试验从荚膜多糖角度出发,在黏附阶段,研究其含量、结构变化与干预猪链球菌生物被膜形成的关系。在芦丁干预下,在猪链球菌生物被膜形成的黏附阶段,通过离心法和酶解法提取荚膜粗多糖,采用Sepharcryl S-300凝胶渗透层析柱纯化荚膜粗多糖后,通过苯酚-硫酸法测得对照组与芦丁组荚膜多糖的含量分别为50.54±2.69%和60.46±4.91%,芦丁干预猪链球菌生物被膜后荚膜多糖的含量显著升高(P0.05)。经过薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLC)分析,对照组与芦丁组荚膜多糖均含有半乳糖(Gal)、葡萄糖(Glc)、N-乙酰氨基葡萄糖(Glc N)、鼠李糖(Rha)和唾液酸(Neu5Ac)。对照组单糖的摩尔数比为:Rha:Gal:Glc:Glc N=1:2.12:1.09:0.71,芦丁组单糖的摩尔数比为:Rha:Gal:Glc:GlcN=1:2.26:0.95:0.73,芦丁干预猪链球菌生物被膜后荚膜多糖的单糖摩尔比值差异不显著(P0.05)。通过核磁共振光谱(NMR)对对照组和芦丁组荚膜多糖与其对应脱唾液酸后的产物进行分析,结果显示对照组与芦丁组荚膜多糖的1H-NMR图谱相同,其脱唾液酸荚膜多糖产物的1H-NMR图谱也相同,说明芦丁干预猪链球菌生物被膜后与对照组相比荚膜多糖结构未发生改变。综上所述,芦丁在黏附阶段干预猪链球菌生物被膜后,导致荚膜多糖含量升高,降低了生物被膜的形成,故其是猪链球菌生物被膜形成的黏附抑制剂。
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.611

【参考文献】
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