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《东北农业大学》 2017年
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紫花苜蓿植株再生体系的建立

姜柳  
【摘要】:紫花苜蓿因其高含量的粗蛋白,以及适应性强而被人们广泛熟知,它含多种维生素及矿物质,是世界上广泛种植的一种优质牧草,从而有“牧草之王”的美称,是畜牧业发展的物质基础。紫花苜蓿龙牧806品种有耐寒、耐旱、耐盐碱、牧草产量高等诸多优点,但也存在病、虫害严重等不足,所以需要应用转基因的技术手段加以改良,得到带有目的性状的转基因改良新品种。本试验以紫花苜蓿龙牧806无菌幼苗的子叶、下胚轴、叶片、根作为外植体材料,通过对四种离体材料的愈伤组织诱导和再分化这一过程的研究,获得紫花苜蓿再生植株,讨论不同激素浓度配比的培养基,在不同阶段对紫花苜蓿再生的影响,本试验研究成果如下:诱导愈伤组织:在4个外植体中,诱导效率最高的是下胚轴,该外植体在培养基A6:MS附加2.0mg/L2,4-D和0.25 mg/LKT上出愈率均可达100%;四种外植体诱导愈伤组织能力依次为:下胚轴根子叶叶片。诱导结果显示,使用生长素2,4-D与KT联合使用的愈伤组织诱导培养基从愈伤组织状态、及诱导率来看优于2,4-D与6-BA联合使用的培养基。暗培养对愈伤组织影响:暗培养处理一段时间对子叶和叶片启动愈伤组织有积极的促进作用,经过培养两种外植体诱导率均提高20%~30%。不定芽分化:4种外植体不定芽分化的研究结果显示,各个外植体均在培养基B5:MS附加0.4 mg/LKT的培养基分化率最高,4种外植体分化效果由高到低依次为:下胚轴根子叶叶片,分化率依次为62.4%、59.4%、54.6%、50.5%。结果显示在相同的培养条件下下胚轴的分化率最高;而单独使用激动素KT对不定芽的诱导效果最好。愈伤组织诱导的时间对不定芽分化的影响:下胚轴外植体经诱导10、20、30、40天后,其分化率分别为30.5%、50.7%、62%、59%;胚性愈伤率在30 d时达到最高,且分化效果最好,即达到62%。蔗糖浓度对分化的影响:在5个不同梯度的蔗糖浓度下,下胚轴和子叶2种外植体,均在20g/L的浓度时分化率最高,当蔗糖浓度超过20 g/L时,褐化现象明显增加,且分化率随蔗糖浓度增加而下降。最终确定最佳外植体为下胚轴外植体,培养条件为愈伤组织诱导培养基A6:MS附加2.0 mg/L 2,4-D和0.25 mg/L,愈伤诱导时间为30天,分化培养基B5:MS附加0.4 mg/LKT,分化蔗糖浓度20 g/L。再生体系周期为60~70d。
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S541.9

【参考文献】
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