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《东北农业大学》 2017年
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马抗西尼罗病毒精制免疫球蛋白F(ab')_2的制备及评价研究

崔健男  
【摘要】:西尼罗病毒病是由西尼罗病毒(West Nile virus,WNV)伴随蚊虫传播感染引发的一种急性传染病,临床表现主要有皮疹、发热、淋巴结肿大和脑炎等症状。WNV主要流行于非洲、中东、北美洲、亚洲西部和中部、欧洲和大洋洲等地区,对公共卫生安全有着极大的威胁。目前为止西尼罗病毒病在人类和动物中频繁的暴发,给疫区带来了重大经济损失和健康威胁,世界动物卫生组织和世界卫生组织已将西尼罗病毒病列入世界重大流行疾病之一。国内虽然并未暴发西尼罗病毒病,但在2011年科学研究者已经从新疆维吾尔族自治区的蚊虫机体中获取到了西尼罗病毒,从突发脑炎病人的脑脊液中检测到了WNV抗体。近些年来由于贸易、旅游的日趋频繁,导致西尼罗病毒病传入中国的几率显著增大,迄今为止还未研制出特效的疫苗和药物能够进行该病的防治,因此研究并制备一种有效的预防及治疗西尼罗病毒病的制剂将具有十分重大的意义。本实验旨在研究并制备马抗西尼罗病毒精制免疫球蛋白F(ab')_2,首先通过制备获得马抗西尼罗病毒高免血清,应用本实验室已建立的西尼罗病毒特异性抗体间接ELISA检测方法监测马匹血清中特异性抗体的效价变化,而后将所制备的马抗西尼罗病毒高免血清进一步通过饱和硫酸铵沉淀法制备出高纯度马抗IgG,将所制备的马抗Ig G进行胃蛋白酶酶切,酶切产物先后通过Protein-A柱和Protein-G柱进行亲和层析分离及纯化,最终制备获得高纯度马抗西尼罗病毒精制免疫球蛋白F(ab')_2,接下来对所制备的马抗西尼罗病毒精制免疫球蛋白F(ab')_2分别进行体外评价和体内评价。实验结果表明:1)制备的马抗西尼罗病毒高免血清中特异性抗体的效价高于1:20480。2)SDS-PAGE分析结果显示,通过分离及纯化所制备的Ig G和F(ab')_2均具有较好的完整性。Ig G显示出两条完整蛋白条带大小分别在55KDa和25KDa左右处,F(ab')_2显示出一条完整蛋白条带大小在25KDa左右处。应用薄层扫描技术,检测出先后通过Protein-A柱和Protein-G柱亲和层析纯化后获得的精制免疫球蛋白F(ab')_2的纯度高于90%。3)体外评价结果显示:以80 PFU WNV为检测标准,经计算所得EC50结果分别为Ig G:4.1μg/m L、F(ab')_2:16.5μg/m L。实验结果证明所制备的Ig G和F(ab')_2针对西尼罗病毒均具有良好的体外中和活性。4)体内评价结果显示:小鼠皮下攻毒量为100 PFU的条件下,在小鼠感染WNV后的前一天、当天以及后一天分别在腹腔注射500μg Ig G或F(ab')_2,每日观察各组小鼠的致死率和发病率(直至观察到第21天)。实验结果证明所制备的Ig G和F(ab')_2均具有良好的体内中和西尼罗病毒的能力。小鼠皮下攻毒量为100 PFU的条件下,次日腹腔注射500μg IgG或F(ab')_2。分别在攻毒后第4天、第6天、第8天取小鼠的脾脏和脑组织检测西尼罗病毒载量。从治疗效果来看,单次给予Ig G和F(ab')_2的条件下,体内治疗实验效果很好。而考虑到用于治疗目的时Ig G或者F(ab')_2需要进行多次的给药,因此可以预期,在多次给药的条件下,所制备的Ig G或者F(ab')_2的治疗效果(尤其针对脾脏,脑组织内病毒的清除)将凸显。综上所述:1)成功制备了马抗西尼罗病毒高免血清共30000m L;2)成功制备了马抗西尼罗病毒精制免疫球蛋白F(ab')_2共1000mg;3)体内外评价结果显示所制备的马抗西尼罗病毒精制免疫球蛋白F(ab')_2具有良好的治疗效果。
【学位授予单位】:东北农业大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:S852.65

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前9条
1 郑小龙;朱来华;王群;孙涛;孙明君;邓明俊;张晓文;;西尼罗病毒病诊断技术研究进展[J];动物医学进展;2014年03期
2 刘永祥;赵忠鹏;罗德炎;陈中伟;杨涛;王希良;高俊杰;;马抗破伤风毒素免疫球蛋白F(ab′)_2新制备工艺的建立[J];中国生物制品学杂志;2011年11期
3 付钰广;任巧云;罗建勋;殷宏;;西尼罗病毒诊断的研究进展[J];中国人兽共患病学报;2011年08期
4 宋春英;;西尼罗病毒研究现状[J];职业与健康;2011年12期
5 饶家辉;王玉平;雷连成;;马抗猫细小病毒特异性免疫球蛋白的研制[J];中国畜牧兽医;2010年01期
6 杨蓉;谢忠平;龙润乡;白惠珠;谭振国;王燕;吴忠香;张勇;;Protein A/G亲和层析在HCV抗体纯化中的应用效果[J];医学研究杂志;2010年01期
7 张晓龙;赵彤言;;西尼罗病毒的宿主及其在传播循环中的作用[J];寄生虫与医学昆虫学报;2008年03期
8 张庶民;我国马免疫球蛋白制品现状及展望[J];中国药事;2004年06期
9 魏荣,王志亮,李其平;在中国可以传播西尼罗河病毒的蚊虫种类[J];中国媒介生物学及控制杂志;2004年01期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 方美玉;任瑞文;刘建伟;;西尼罗病毒病研究进展[A];新发传染病防治学习研讨会论文集[C];2008年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张铮;吕文;杨培荣;李旭龙;邓峰;;宝鸡市淡色库蚊对5种杀虫剂的抗药性研究[J];中华卫生杀虫药械;2017年06期
2 高靖晶;谢林蓬;姚晓东;季冲;李海玲;;破伤风抗毒素生物制品及其分离纯化工艺研究进展[J];山东化工;2017年19期
3 李文;宋杨一嫣;魏捷;吕菁君;杜贤进;罗小敏;李佳;;内外兼修——破伤风的急诊诊治浅析[J];临床急诊杂志;2017年08期
4 邱泊宁;王翀;赵永坤;胡星星;王化磊;曹增国;盖微微;崔健男;闫飞虎;杨松涛;夏咸柱;;层析技术制备马抗中东呼吸综合征冠状病毒F(ab’)_2[J];中国生物制品学杂志;2017年04期
5 王淑娟;宋晓晖;迟田英;孙成友;王清华;吕艳;邹艳丽;吴晓东;王志亮;;西尼罗河热的流行历史、现状及防控[J];中国动物检疫;2016年12期
6 丁细霞;丘立文;郭勇晖;;西尼罗病毒NS1单克隆抗体的制备及鉴定[J];免疫学杂志;2016年08期
7 曹增国;李岭;王化磊;金宏丽;郑学星;冯娜;李倩;赵国星;闫飞虎;赵永坤;王铁成;高玉伟;杨松涛;夏咸柱;;西尼罗病毒糖蛋白第三结构域的原核表达及鉴定[J];中国兽医学报;2016年01期
8 魏绪强;刘婷;周小洁;李秋红;张勇;;北京市城区蚊密度调查及西尼罗病毒携带情况研究[J];中华卫生杀虫药械;2015年06期
9 段金花;蔡松武;吴军;邹钦;阴伟雄;;广东省蚊媒西尼罗病毒携带情况调查研究[J];中国媒介生物学及控制杂志;2015年06期
10 伍贤军;赵兵;缪璇;钱程;王冰瑜;李晓萌;杨百全;;一种新的混合斑精子分离方法[J];高等学校化学学报;2015年05期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 余蓓蓓;卢亦愚;谢鑫友;徐昌平;张钧;;双重荧光定量PCR检测西尼罗病毒和基孔肯雅病毒[J];临床检验杂志;2013年06期
2 李林海;陈丽丹;廖杨;陈建芸;石玉玲;;西尼罗河病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用研究[J];实用医学杂志;2012年19期
3 邱璐;李小林;蒋静;王艳;周小俊;;实时荧光PCR检测西尼罗病毒方法的建立[J];畜牧与兽医;2012年09期
4 徐焕洲;平芮巾;季汝武;王琳;杨鹏飞;张丽萍;岳启安;胡孔新;;应用DPO引物技术同时检测5种蚊媒病毒的多重RT-PCR方法[J];中国国境卫生检疫杂志;2012年02期
5 吕喆;于亚洲;胡桂学;赵哲;;西尼罗河病毒病的研究进展[J];经济动物学报;2012年01期
6 付钰广;任巧云;罗建勋;殷宏;;西尼罗病毒诊断的研究进展[J];中国人兽共患病学报;2011年08期
7 吴峥;张文炳;黎诚耀;朱利;张玲;赵卫;;西尼罗病毒PCR检测方法的建立[J];现代预防医学;2010年20期
8 李淑华;鹿文英;曹广文;;利用环介导等温扩增技术检测西尼罗病毒[J];第二军医大学学报;2010年06期
9 靳寿华;张海林;;西尼罗病毒的研究进展[J];中国病原生物学杂志;2009年08期
10 陈晓;谢鹏;;西尼罗病毒感染的病原学检测方法[J];中国媒介生物学及控制杂志;2009年03期
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